人乳腺癌细胞；BT549+GFP+LUC 新品

                                                           人乳腺癌细胞；BT549+GFP+LUC
产品信息：

人乳腺癌细胞系BT549+GFP+LUC是一种经过基因改造的三阴性乳腺癌细胞系，携带绿色荧光蛋白（GFP）和荧光素酶（Luciferase）报告基因，常用于肿瘤研究中的细胞追踪和活体成像。以下是关于BT549+GFP+LUC细胞的详细说明、培养操作和特性：

1. 细胞特性

来源：BT549细胞系最初从一位72岁女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立，属于三阴性乳腺癌（TNBC）类型，即雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（HER2）均为阴性123

基因改造：BT549+GFP+LUC细胞系在原始BT549细胞基础上转入GFP和Luc基因，分别用于荧光显微镜下细胞可视化和活体生物发光成像，便于研究细胞增殖、转移及药物反应

形态与生长：呈上皮样形态，贴壁生长，倍增时间约为24-36小时

2. 培养操作

2.1. 培养基

基础培养基：RPMI-1640培养基。

添加剂：10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-链霉素（P/S）溶液、0.023 U/ml胰岛素。

2.2. 培养条件

温度：37°C。

气体环境：95%空气 + 5% CO。

湿度：饱和湿度。

2.3. 传代步骤

观察细胞密度：当细胞密度达到80%-90%时进行传代。

去除旧培养基：轻轻吸去培养瓶中的旧培养基。

清洗细胞：用预热的PBS轻轻清洗细胞1-2次。

消化细胞：加入适量的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况。

终止消化：加入适量含血清的新培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落并均匀悬浮。

分装细胞：将细胞悬液按1:2至1:3的比例分装到新的培养瓶中，加入新鲜培养基。

继续培养：将培养瓶放回培养箱中继续培养。

2.4. 冻存与复苏

冻存：使用含有90%胎牛血清和10%DMSO的冻存液，将细胞悬液分装到冻存管中，按照标准冻存程序逐步降温后存放在液氮罐中。

复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37°C水浴中摇晃解冻，然后将细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中，离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中继续培养。

3. 注意事项

细胞状态监控：定期观察细胞形态和生长状态，确保无污染，并根据实验需求调整传代比例和培养条件。

用途限制：该细胞系仅供科研使用，不得用于临床或动物实验。

培养操作要点：

细胞培养

是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件），使细胞生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的技术。

根据细胞种类和生长方式，培养操作和特性各有不同。

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

具体特点如下：：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

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