人Adenovirus5转化胚肾细胞；2V6.11 新品

                                                           人Adenovirus5转化胚肾细胞；2V6.11
产品信息：

人Adenovirus5转化胚肾细胞2V6.11是一种由腺病毒5型（Ad5）DNA转化的人胚肾细胞系，为HEK293细胞的衍生株，具有贴壁生长、上皮细胞样形态的特性，常用于病毒包装、基因功能研究及重组蛋白生产。以下是其详细说明及培养操作要点：

来源与背景：2V6.11于2001年从HEK293细胞（人胚肾细胞株）衍化而来。HEK293细胞本身由腺病毒5型E1区段基因转染建立，而2V6.11通过额外转染质粒pVgRXR（携带Zeocin抗性标记）和pEKORF6（含Ad5 E4 ORF6基因，编码E4 24K蛋白）获得。其基因组整合了腺病毒DNA，可诱导表达人腺病毒E4 34kDa蛋白，适用于研究腺病毒E4癌基因功能。

基本属性：

种属：人源（Homo sapiens），组织来源：胎儿肾脏（男性），细胞类型：上皮细胞样。

生长特性：贴壁生长，倍增时间约24-36小时，密度达80%-90%时需传代。

生物安全等级：BSL2（需在二级生物安全实验室操作）。

应用：高转染效率使其成为病毒包装（如慢病毒、腺相关病毒AAV）、基因功能研究、重组蛋白生产及药物筛选的理想工具。

培养条件与培养基：

培养条件：37℃、5% CO、95%空气，培养箱湿度70%-80%。

培养基：常用MEM或DMEM基础培养基，添加10%胎牛血清（FBS）、1%双抗（P/S，青霉素-链霉素），部分方案需添加非必需氨基酸（NEAA）。运输用灌液培养基不可用于长期培养，需更换新鲜配制的完全培养基。

培养操作步骤

复苏细胞：

冻存管（1mL细胞悬液）37℃水浴快速解冻，加入4-6mL完全培养基混匀。

1000rpm离心3-5分钟，弃上清，用1-2mL培养基重悬细胞。

接种至T25培养瓶（或6cm皿），补加6-8mL培养基，37℃培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代（密度达80%-90%时进行）：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加入1-2mL 0.25%胰蛋白酶消化液（含0.53mM EDTA），37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落时，加入5mL以上完全培养基终止消化。

轻轻吹打收集细胞，1000rpm离心5分钟，弃上清，用1-2mL培养基重悬。

按1:2至1:4比例分瓶（如T25瓶传2个新T25瓶），补加5-8mL完全培养基，37℃培养。

细胞冻存：

细胞生长至80%汇合度时，PBS清洗一次，胰蛋白酶消化收集细胞。

1000rpm离心5分钟，弃上清，用冻存液（如90%血清+10%DMSO或无血清冻存液）重悬，细胞密度5×10?～1×10?/mL。

分装至冻存管（1mL/管），程序降温（-20℃ 1.5小时→-80℃ 2小时→液氮），或直接放入-80℃冰箱后转入液氮罐。

注意事项

收到细胞后：检查培养瓶是否完好（漏液、破损），用75%酒精消毒瓶壁，显微镜观察细胞状态（拍照留存），培养箱静置2-4小时后处理。

培养关键：严格无菌操作，培养基现配现用，传代比例1:2至1:4，每周换液2-3次。初次传代建议1:2传代，并冻存备用。

产品用途：仅限科研使用，未经许可不得用于临床或转让第三方。

培养操作要点：

细胞培养

是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件），使细胞生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的技术。

根据细胞种类和生长方式，培养操作和特性各有不同。

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

具体特点如下：：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

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