NTERA-2clD1细胞

产品信息：

NTERA-2cl.D1细胞是一种人睾丸胚胎癌细胞系，呈上皮样形态，具有贴壁或悬浮的混合生长特性；培养时需使用DMEM高糖培养基（含10%FBS），37℃、5% CO₂环境，传代比例1:2至1:6，2-3天换液一次。

细胞特性

来源与背景：1980年从Tera-2细胞系的裸鼠异种移植中建立，属生物安全等级1级。

形态与生长：上皮细胞样，密集培养时可能出现空泡现象，可贴壁或悬浮生长（依实验条件）。

分子特征：已通过外显子组、蛋白质组、转录组等多组学分析，常用于神经分化研究、耐药性模型（如顺铂耐药机制）、表观遗传学分析等。

培养条件

培养基：DMEM高糖（含丙酮酸钠）+10%FBS；空气95%，二氧化碳5%；37℃培养。

传代与冻存：传代比例1:2至1:6，2-3天换液一次；冻存液为无血清冻存液或95%完全培养基+5%DMSO，液氮或-80℃保存。

培养操作

复苏细胞：冻存管37℃水浴快速解冻，加入4-6mL完全培养基混匀；1000rpm离心3-5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬后接种至T25培养瓶（或6cm皿），37℃、5%CO₂培养箱中培养过夜；第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：贴壁细胞，弃去培养上清，PBS清洗1-2次，加入1ml 0.25%Trypsin-EDTA消化1-3分钟（37℃），细胞变圆脱落后加2-3ml完全培养基终止消化，吹打均匀，1000rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬，按1:2至1:6比例分瓶；悬浮细胞，收集细胞悬液，1000rpm离心5分钟，弃上清，加1-2ml培养液吹匀，按1:2到1:5比例分装。

细胞冻存：细胞生长良好时，弃培养基，PBS清洗后加入1ml胰酶消化（细胞变圆脱落），加入2ml完全培养基终止消化，血球计数板计数，1000rpm离心5分钟，用血清重悬细胞，加DMSO至终浓度10%，混匀后1ml/管分装至冻存管，程序降温盒中-80℃冰箱存放24小时以上后转入液氮灌储存。

注意事项

收到细胞后需检查包装及培养瓶是否完好，用75%酒精消毒表面，显微镜观察细胞状态；静置2-4小时后培养。

培养过程中可出现部分细胞漂浮，属正常现象，可离心富集后传代使用。

运输用灌液培养基不可继续培养，需更换新鲜完全培养基；首次传代建议1:2传代。

操作全程需严格无菌，定期检测支原体、细菌、真菌污染。

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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