NCI-H345[H345]细胞

产品信息：

NCI-H345[H345]细胞是一种人小细胞肺癌细胞系，源自40岁男性肺组织，呈上皮样形态，具有贴壁或悬浮的混合生长特性；培养时需使用DMEM/F12培养基（含10%FBS及多种添加剂），37℃、5% CO₂环境，传代比例1:3，2-3天传一代。

细胞特性

来源与背景：源自40岁男性肺小细胞肺癌组织（骨髓转移），种属为人，肿瘤类型为小细胞肺癌。

形态与生长：上皮细胞样，混合生长状态（悬浮多细胞聚集物及少部分贴壁），部分培养条件下呈贴壁或悬浮生长。

分子特征：未查询到具体分子标志，作为小细胞肺癌细胞系，可能表达神经内分泌标志物（如突触素、嗜铬粒蛋白A）。

培养条件

培养基：DMEM/F12 Medium + 0.005mg/ml Insulin + 0.01 mg/ml Transferrin + 30 nM Sodium selenite +10 nM Hydrocortisone+10 nM beta-estradiol+2 mM L-Glutamine Solution + 10% FBS ；部分方案可用RPMI1640+10%FBS。

培养环境：37℃，5% CO₂，饱和湿度培养箱。

传代与冻存：传代比例1:3，细胞密度达80%-90%时传代，2-3天传一代；冻存液为90%FBS+10%DMSO，液氮或-80℃保存。

培养操作

复苏细胞：冻存管37℃水浴快速解冻，加入4-6mL完全培养基混匀；1000rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬后接种至T25培养瓶（或10cm皿），37℃、5%CO₂培养箱中培养过夜；第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：贴壁细胞，弃去培养上清，PBS清洗1-2次，加入1ml 0.25%Trypsin-EDTA消化3-5分钟（37℃），细胞变圆脱落后加3ml完全培养基终止消化，吹打均匀，1000rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬，按1:3比例分瓶；悬浮细胞，收集细胞悬液，1000rpm离心5分钟，弃上清，加1-2ml培养液吹匀，按1:2到1:5比例分装。

细胞冻存：细胞生长良好时，弃培养基，PBS清洗后加入1ml胰酶消化（细胞变圆脱落），加入2ml完全培养基终止消化，血球计数板计数，1000rpm离心5分钟，用血清重悬细胞，加DMSO至终浓度10%，混匀后1ml/管分装至冻存管，程序降温盒中-80℃冰箱存放≥2小时后转入液氮灌储存。

注意事项

收到细胞后需检查包装及培养瓶是否完好，用75%酒精消毒表面，显微镜观察细胞状态；静置2-4小时后培养。

培养过程中可出现部分细胞漂浮，属正常现象，可离心富集后传代使用。

运输用灌液培养基不可继续培养，需更换新鲜完全培养基；首次传代建议1:3传代。

操作全程需严格无菌，定期检测支原体、细菌、真菌污染。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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功能特点

通过被动运输和主动运输实现物质跨膜转运；以ATP为核心载体，通过线粒体氧化磷酸化或叶绿体光合磷酸化途径供能；通过受体-第二信使-效应器的级联反应模式进行信号转导；原核细胞采用二分裂，真核细胞则通过有丝分裂、减数分裂等方式繁殖；细胞可进行程序性死亡（凋亡），并在多细胞生物中实现分化形成不同组织