NCI-H1648细胞

产品信息：

NCI-H1648细胞是一种人非小细胞肺癌（腺癌型）细胞系，常用于肺癌相关研究。

1. 细胞基本信息

来源：人非小细胞肺癌（腺癌）患者胸腔积液。

形态：上皮细胞样，贴壁生长。

分子特征：常见TP53突变，EGFR野生型，表达CK7、TTF-1等肺腺癌相关标志物。

应用领域：肺腺癌发病机制、药物筛选、耐药机制及转化医学研究。

2. 培养条件

培养基：专用完全培养基（如RPMI-1640或DMEM，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素）。

气相：95%空气+5%二氧化碳。

温度：37℃。

3. 培养操作步骤

复苏：

将冻存管在37℃水浴中迅速解冻。

加入预热的完全培养基，轻轻混匀。

1000rpm离心3-5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬细胞。

接种至T25培养瓶或6cm皿中，37℃培养箱培养过夜。

第二天观察细胞状态并更换新鲜培养基。

传代（细胞密度达80%-90%时进行）：

弃去旧培养基，用PBS润洗细胞1-2次。

加入胰酶消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA），37℃消化1-3分钟，显微镜下观察细胞变圆并脱落时终止消化。

加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打收集细胞。

1000rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬细胞。

按1:2至1:5比例分瓶，继续培养。

冻存：

收集对数生长期细胞，离心后弃上清。

用冻存液（90%FBS+10%DMSO）重悬细胞，调整细胞密度至(1-5)×10^6 cells/mL。

分装至冻存管，标记后放入程序降温盒，-80℃过夜后转入液氮罐长期保存。

4. 注意事项

细胞形态观察：定期在显微镜下观察细胞形态和生长状态，确保细胞正常贴壁生长。

污染控制：严格无菌操作，定期检测支原体污染。

培养基更换：根据细胞生长情况及时更换培养基，避免营养耗尽影响细胞生长。

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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