MDCKII细胞

                                                           MDCKII细胞
产品信息：

MDCK-II细胞是一种犬肾上皮样贴壁细胞系，亚型来自Madin-Darby犬肾细胞，培养条件为含10%-20%胎牛血清的DMEM或MEM基础培养基，37℃、5%CO₂饱和湿度环境；传代推荐1:2至1:3比例，当细胞密度达80%-90%时用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分钟，终止离心后分瓶培养；冻存建议用含10%DMSO的血清冻存液程序降温至-80℃后转入液氮保存。

细胞基本说明

来源与形态：MDCK-II细胞源于犬肾组织，细胞形态呈上皮细胞样，贴壁生长；部分亚型如MDCK-II/RFP带红色荧光标记。

生长特性：贴壁依赖性生长，倍增时间约24-48小时，传代周期通常为2-3天，每周换液2-3次；密集培养时可见巨大空泡，属正常特性。

生物安全：生物安全等级为1级，支原体、细菌、酵母和真菌检测均为阴性，部分批次还通过HIV、乙型肝炎、丙型肝炎等病原体检查。

培养条件与操作步骤

复苏细胞

将冻存管在37℃水浴快速解冻（1-2分钟），酒精消毒后转移至离心管，加5-10mL预热完全培养基混匀，1000rpm离心3-5分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬，接种T25瓶（5-7mL/瓶），次日换液并检查细胞密度。

细胞传代

贴壁细胞：弃培养上清，用不含钙镁离子的PBS润洗1-2次；加1-2mL 0.25%胰酶-EDTA消化液，37℃孵育1-2分钟，镜下观察细胞变圆并脱落，加5mL完全培养基终止消化，吹打均匀后1000rpm离心5分钟，弃上清用新鲜培养基重悬，按1:2至1:6比例分瓶（如两个T25瓶），补充5-8mL/瓶完全培养基。

悬浮细胞：收集细胞悬液，1000rpm离心5-10分钟，弃上清，补加1-2mL培养液重悬，按1:2至1:5分瓶或采用半数换液法。

细胞冻存

细胞生长状态良好时，弃培养基，PBS清洗一次；加适量胰酶消化（细胞变圆脱落），加完全培养基终止消化，离心（1000rpm，4-10分钟），弃上清；根据细胞数量加入无血清冻存液（如含10%DMSO），调整细胞密度至1×10⁶-1×10⁷/mL，分装冻存管，程序降温（如-80℃过夜）后转入液氮长期保存。

注意事项与售后条款

运输处理：收到细胞后用75%酒精擦拭瓶身，超净台内静置2-4小时；若瓶盖未松开需拧松，镜下检查污染及脱落细胞，运输中脱落的活细胞可离心富集后传代。

污染防控：严格无菌操作，若培养基浑浊或瓶身破损需立即联系供应商；售后条款通常要求48小时内提交污染证据（如台盼蓝染色照片），核实后重发。

使用限制：细胞仅用于科研，未经许可不得转让第三方；首次传代建议1:2分瓶，2-3天换液一次。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

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注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。