Kelly细胞

                                                           Kelly细胞
产品信息：

Kelly细胞是一种人神经母细胞瘤细胞系，常用于癌症研究，尤其是神经母细胞瘤的机制研究、药物筛选和靶向治疗评估。

细胞特性

来源与背景：Kelly细胞源自一名15岁女性神经母细胞瘤患者的骨髓，属于MYCN基因扩增亚型，是研究神经母细胞瘤的重要模型。

形态与生长：细胞呈神经母细胞样形态，贴壁生长，具有较高的增殖活性。

分子特征与应用：MYCN基因扩增，表达神经母细胞瘤相关标志物，适用于研究肿瘤发生机制、药物敏感性（如GD2抗体）、耐药机制及细胞疗法评估等。

培养条件

培养基与环境：推荐使用RPMI-1640培养基，添加10%胎牛血清（FBS）、1% GlutaMAX和1% NEAA，37℃、5% CO₂、高湿度培养箱中培养。

传代与冻存：传代比例1:3-1:6，每2-3天换液一次；冻存条件为90%FBS+10%DMSO，液氮长期保存。

培养操作

复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，将细胞悬液转移至含有5-6 mL预温完全培养基的离心管中，1000 rpm离心3-5分钟，弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种于T25培养瓶或6 cm培养皿，培养过夜。

传代：当细胞密度达到80%-90%时进行传代。弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，加入1-2 mL消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落时，加入5 mL以上含10%血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，离心收集细胞（1000 rpm，8-10分钟），弃去上清液，用1-2 mL培养基重悬，按1:3至1:6比例分到新的培养瓶中，补充5-6 mL完全培养基，继续培养。

冻存：选择生长状态良好的细胞，用PBS清洗一次，加入适量胰酶消化液使细胞脱落，制成细胞悬液，1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，用适量的冻存液重悬细胞，分装至冻存管中，先将细胞冻存管放置于-80℃冰箱中保存2小时以上，然后转入液氮罐中长期保存。

优点与局限性

优点：作为神经母细胞瘤模型细胞，实验重复性强，转染效率高，适合机制研究和药物筛选；模拟神经母细胞瘤发生及耐药机制。

局限：单一细胞系不能完全代表神经母细胞瘤异质性，需结合体内模型验证。

注意事项：收到细胞后检查瓶体完整性及污染迹象，75%酒精消毒表面，显微镜观察细胞状态并拍照留存；运输用的培养基不可再用于细胞培养，需换新配制完全培养基；首次传代建议保留原瓶培养基对比培养。

细胞类型与特性：

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。

特殊细胞的生物特性举例：

成纤维细胞：具丰富粗面内质网、高尔基体，能合成胶原纤维、弹性纤维及有机基质；在外伤刺激下可恢复幼稚状态，参与组织修复。

肿瘤细胞：具无限增殖、贴壁依赖或悬浮生长、易转化等特性，常用于药物筛选与癌变机制研究。

神经干细胞：具多向分化潜能（可分化为神经元、星形胶质细胞等），增殖能力强，在体外培养中可形成克隆球。

注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。

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