KE-39细胞

                                                           KE-39细胞
产品信息：

KE-39细胞是一种人胃癌细胞系，呈上皮细胞样，贴壁生长，常用于胃癌机制研究和药物筛选。

细胞特性

来源与背景：源自77岁日本男性胃癌组织，种属来源为人，性别年龄为77岁，日本男性。

形态与生长：上皮细胞样，贴壁生长，部分细胞在运输中易脱落，属正常现象。

分子特征：未查询到具体分子标志，作为胃癌细胞系，可能表达胃癌相关标志物。

培养条件

培养基：推荐使用RPMI1640 + 10%胎牛血清（FBS），或DMEM培养基，添加1%青霉素/链霉素（P/S）。

培养环境：37℃，5% CO₂，饱和湿度培养箱。

传代与冻存：传代比例为1:2-1:3，细胞密度达80%-90%时进行传代；冻存液为90%FBS + 10%DMSO，液氮或-80℃保存。

培养操作

复苏细胞：冻存管37℃水浴快速解冻，加入5mL完全培养基混匀，1000rpm离心5分钟，弃上清，用5mL完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，37℃、5%CO₂培养箱培养，第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：

贴壁细胞：弃去培养上清，PBS清洗1-2次，加入1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于37℃消化1-2min，显微镜下观察细胞变圆并脱落，加入完全培养基终止消化，吹打均匀，1000rpm离心5分钟，弃上清，加1-2mL培养液重悬，按1:2-1:3比例分瓶，补加5-8mL培养基/瓶。

悬浮细胞：收集细胞悬液，1000rpm离心8-10分钟，弃上清，加1-2mL培养液吹匀，按1:2-1:3比例分瓶；或采用半数换液方式，弃半数培养基后分装。

细胞冻存：细胞生长至80%汇合度时，弃培养液，PBS清洗一次，加入约1mL消化液（0.25%胰蛋白酶），消化后加5mL完全培养基终止，吹打脱落，转移至离心管，1000rpm离心5分钟，弃上清，加入1mL无血清冻存液重悬，混匀后转入冻存管，直接放入-80℃冰箱（如需转入液氮灌，需存放24小时以上）。

注意事项

污染防控：操作全程需严格无菌，定期检测支原体、细菌、真菌污染（细胞检测应不含HIV-1、HBV、HCV等）。

细胞状态监测：复苏后24小时及传代后需镜下观察细胞生长状态和污染情况，确保细胞活力。

售后条款：如细胞污染、丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题，部分供应商提供重发服务（需在规定时间内提交真实实验结果或细胞状态照片）。

其他：运输用灌液培养基不可继续培养，需更换新配制的完全培养基；首次传代建议1:2传代。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

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注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。