HuH28细胞

产品信息：

HuH28细胞为人胆管癌细胞系，贴壁生长，形态呈上皮细胞样，来源自37岁女性胆管癌组织，培养时推荐使用DMEM或RPMI-1640基础培养基并添加10%胎牛血清，细胞密度达80%-90%时进行传代。

细胞基本特性

来源与形态：HuH28细胞源自37岁女性胆管癌组织，细胞形态为上皮细胞样，呈贴壁生长特性。支原体、细菌、酵母和真菌检测均为阴性，部分批次还通过了HIV、乙型肝炎、丙型肝炎等病原体检查。

培养条件：推荐使用DMEM（高糖）或RPMI-1640基础培养基，添加10%胎牛血清（FBS），培养环境为37℃、5% CO2及95%空气，培养箱湿度控制在70%-80%。

生长与传代：细胞密度达到80%-90%时进行传代，传代比例通常为1:2至1:3，每周换液2-3次。贴壁细胞传代时需用不含钙镁离子的PBS润洗，加入0.25% Trypsin-0.53mM EDTA消化液消化1-2分钟，待细胞变圆并脱落时加入完全培养基终止消化，吹打制成单细胞悬液后分瓶培养。

细胞接收与处理

运输与验收：细胞运输方式包括干冰运输（冻存管）或常温运输（复苏细胞）。收到细胞后需检查包装是否漏液或破损，用75%酒精消毒后置于超净台内，培养2-4小时后观察细胞状态。

复苏操作：将冻存管在37℃水浴中迅速解冻，加入完全培养基混匀后离心（1000RPM，4-5分钟），弃上清后重悬细胞并接种至培养瓶中，培养过夜后换液。若细胞密度未超过80%，可直接加入6ml完全培养基继续培养；若超过80%，需按上述传代方法处理。

细胞冻存与保存

冻存方法：待细胞生长至80%汇合度时，用胰酶消化并收集细胞，离心后弃上清，用含90%血清和10% DMSO的冻存液重悬，调整细胞密度至1×10⁶个/ml以上，分装至冻存管中。冻存过程推荐程序降温（如-20℃ 1.5小时后转入-80℃），最终保存于液氮罐中。

保存建议：收到细胞后首次传代时建议冻存一支备用，后续根据细胞状态定期冻存以保持细胞活性。

注意事项

污染防控：所有操作需在二级生物安全柜内进行，防护潜在生物危害；培养过程中若出现黑色颗粒或小黑点，可能源于细胞本身、环境、血清或培养基，需定期检查细胞状态并严格无菌操作。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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功能特点

通过被动运输和主动运输实现物质跨膜转运；以ATP为核心载体，通过线粒体氧化磷酸化或叶绿体光合磷酸化途径供能；通过受体-第二信使-效应器的级联反应模式进行信号转导；原核细胞采用二分裂，真核细胞则通过有丝分裂、减数分裂等方式繁殖；细胞可进行程序性死亡（凋亡），并在多细胞生物中实现分化形成不同组织