Daoy人脑髓母细胞瘤细胞

                                                           Daoy人脑髓母细胞瘤细胞
产品信息：

Daoy细胞是一种人脑髓母细胞瘤细胞系，源自一名4岁男孩的后颅窝肿瘤活检组织，由西澳大利亚皇家珀斯医院的P.F. Jacobsen于1985年建立。该细胞系收录于ATCC（编号HTB-186），属于贴壁生长的上皮细胞样细胞，来源为结缔组织增生性小脑髓母细胞瘤。

细胞特性

来源与形态：4岁男性后颅窝肿瘤组织，上皮细胞样（多边形或梭形），贴壁生长。

分子特征：原始肿瘤具有神经元和胶质细胞分化特征，但细胞系未保留；cAMP处理不诱导S100/GFAP表达。表达同工酶AK-1、ES-D等，致瘤性阳性（裸鼠可成瘤）。

生长特性：倍增时间约34小时，生物安全等级1级。

培养条件

基础培养基：MEM（含NEAA）或DMEM，添加10%FBS、1%P/S；部分推荐补充1mM钠丙酮酸盐。

培养环境：37℃、5%CO₂、饱和湿度。

操作步骤

复苏：37℃水浴解冻冻存管，转移至含预热培养基的离心管，1000rpm离心5分钟；弃上清，重悬后接种于T25培养瓶，37℃培养箱过夜。

传代（密度80%-90%时）：

弃培养上清，PBS润洗1-2次。

加0.25%胰酶-EDTA（1-2ml），37℃消化1-2分钟（显微镜下观察变圆）。

加完全培养基终止消化，吹打混匀，1000rpm离心3-5分钟；弃上清，重悬后按1:2-1:6比例分瓶。

冻存：对数生长期细胞离心后，用冻存液（如90%FBS+10%DMSO）重悬，程序降温盒-80℃过夜后转入液氮。

注意事项

收到细胞后需检查污染（显微镜观察浑浊度），贴壁较弱需控制消化时间；运输后部分细胞死亡属正常现象，可离心回收。

仅用于科研，避免用于临床或诊疗。定期检测STR（如Amelogenin X, CSF1PO 11等）和支原体。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

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注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。