L Wnt-3A 小鼠成纤维细胞

                                                           L Wnt-3A 小鼠成纤维细胞
产品信息：

L Wnt-3A 小鼠成纤维细胞是由 L 细胞（小鼠成纤维细胞系 L929）经基因改造后稳定表达 Wnt3A 蛋白的细胞系，主要用于分泌活性 Wnt3A 蛋白（用于条件培养基支持干细胞培养）和研究 Wnt/β-catenin 信号通路。

基本特性

来源与背景：由 L929 小鼠成纤维细胞（或 L-M(TK-) 细胞）经 Wnt-3A 基因转染构建，稳定分泌 Wnt3A 蛋白，用于干细胞培养和信号通路研究。

形态与生长：贴壁生长，

培养条件：

基础培养基：DMEM（高糖） + 10% 胎牛血清（FBS） + 1% 青霉素/链霉素（P/S）；需添加 G418（0.4 mg/mL）进行筛选。

培养环境：37°C、5% CO₂、95% 空气。

冻存与复苏：

冻存液：90% FBS + 10% DMSO（或无血清冻存液）；液氮储存。

复苏：37°C 水浴快速解冻，离心去除冻存液后接种于培养瓶。

培养操作流程

传代（细胞密度达 80%-90% 时）：

弃培养上清，PBS 洗涤 1-2 次；加 0.25% 胰酶（含 EDTA）消化 1-2 分钟（37°C），显微镜下观察细胞变圆后终止消化。

离心（1000 rpm，4 分钟），弃上清，加培养基重悬；按 1:2 至 1:5 比例分瓶（或 1:3-1:4 传代比例）。

换液：每 2-3 天更换新鲜培养基。

注意事项：

收到细胞后检查包装完整性及污染情况（细菌、真菌、支原体）；贴壁细胞可直接消化传代，悬浮细胞需离心收集。

培养基需预热（37°C），操作过程避免污染。

实验应用与关键特性

主要应用：

制备 Wnt3A 条件培养基（用于维持胚胎干细胞或类器官的未分化状态）。

研究 Wnt 信号通路、癌症模型（如结直肠癌）及药物筛选（如 Wnt 抑制剂）。

关键特性：

组成型分泌 Wnt3A 蛋白，需通过条件培养基收集活性蛋白。

生物安全等级 1，支原体检测阴性（部分品牌）。

保藏机构：ATCC（CRL-2647）。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。

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注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。