人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL）elisa测定试剂盒

【试剂盒参数】

中文名称：人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL）elisa试剂盒

产品规格：48孔/盒 96孔/盒

检测方法：酶联免疫法

检测时间：2-3H

独特优势：灵敏度高、特异性强、重复性好

订购试剂盒可免费代测，收到样本7个工作日出结果，具体可以咨询我司客服人员。

用 途 ：科研实验专用，不得用于临床诊断。

货期供应：2个工作日

特别说明：产品保证质量有任何质量问题包退换，欢迎大家前来选购。

存 储 ：2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻

保质期 ：6个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。

【实验原理】

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品含量。

【试剂盒组成】

【产品展示】

【样本处理及要求】

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

【操作步骤】

1．从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2．设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

3．样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。样本不足，或者样本浓度过高，可用样本稀释液做稀释。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5．弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

【试剂盒性能】

1. 灵敏度：最低检测浓度小于1.0ng/mL（具体以实际说明书为准）。

2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

【技术小提示】

4. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

5. 为了避免交叉感染，配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。

6. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

7. 混合后的显色底物在上板前应为无色，请避光保存；假如微孔板后，将由物色变成不同深度的蓝色。

8. 终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液体未混匀；请充分混合。