柯萨奇病毒 A4 型 / 柯萨奇病毒 A10 型 / 柯萨奇病毒 A6 型检测试剂盒( 三重荧光 PCR 法 ) 新品

柯萨奇病毒 A4 型 / 柯萨奇病毒 A10 型 / 柯萨奇病毒 A6 型检测试剂盒( 三重荧光 PCR 法 )

简介：

柯萨奇病毒A4型、A10型和A6型三重荧光PCR检测试剂盒是一种基于实时荧光定量PCR技术的体外诊断试剂，用于同时检测和区分这三种柯萨奇病毒亚型。

该试剂盒具有高灵敏度、高特异性和快速检测的特点，适用于临床样本中柯萨奇病毒的检测和分型。

二、检测原理

三重荧光PCR技术：该试剂盒采用多重荧光PCR技术，在同一反应体系中同时检测三种柯萨奇病毒亚型(A4、A10、A6)，每种病毒对应特定的荧光通道。

探针设计：针对每种病毒的特异性保守序列设计引物和TaqMan探针，探针上标记不同的荧光报告基团(如FAM、HEX/VIC、CY5等)和淬灭基团。

扩增过程：在PCR扩增过程中，Taq酶具有5'→3'外切酶活性，可水解与模板结合的探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号，实现实时定量检测。

三、主要组成成分

PCR反应液：包含dNTPs、Mg2?、缓冲液等PCR反应必需成分

酶混合液：热启动Taq DNA聚合酶、逆转录酶(若为RT-PCR)

阳性对照：含有柯萨奇病毒A4、A10、A6型特异性序列的重组质粒或灭活病毒

阴性对照：无核酸酶水或已知阴性样本

内标系统：部分试剂盒包含内标以监控提取和扩增过程

四、样本要求

适用样本类型：

咽拭子/喉拭子

粪便样本

疱疹液(对于A6型引起的手足口病疱疹)

脑脊液(严重病例)

血清/血浆(特定研究目的)

样本采集与保存：

使用专用病毒采样管采集

2-8℃保存不超过72小时，-70℃长期保存

避免反复冻融

五、检测流程简介

核酸提取：

采用商业化核酸提取试剂盒或自动化提取仪

推荐使用针对病毒RNA的提取方法

反应体系配制：

按照说明书比例混合各组分

加入提取的模板核酸

PCR扩增：

典型程序：逆转录(50℃ 15-30min)→预变性(95℃ 2-5min)→40-45个循环(95℃ 15s→60℃ 30-60s，采集荧光)

具体参数需参照试剂盒说明书

结果分析：

设置合适的阈值和基线

根据荧光信号出现的时间和强度判断结果

扩增曲线呈"S"形且Ct值≤35-40判为阳性

六、性能指标简介

灵敏度：通常可检测到10-100拷贝/反应的病毒核酸

特异性：与其它柯萨奇病毒亚型及常见呼吸道/肠道病原体无交叉反应

重复性：Ct值的变异系数(CV)一般<5%

检测时间：约1.5-2.5小时(不包括核酸提取时间)

七、临床意义简介

柯萨奇病毒A4型：与疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎等相关

柯萨奇病毒A10型：引起手足口病(常为轻症)、呼吸道感染

柯萨奇病毒A6型：近年来引致手足口病暴发的主要病原体之一，症状可能较重且皮疹分布不典型

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