马源性成分检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

商品属性：

一、 概述与意义

检测目标： 特异性检测样品中的马源性成分，即马的DNA片段。

应用领域：

食品真实性鉴定： 用于检测肉制品（如牛肉、羊肉制品）中是否掺杂了未经标示的马肉。

饲料安全监控： 检测动物饲料中是否含有违禁的马源性物质（如在反刍动物饲料中）。

法医学与物种鉴定： 对未知肉制品、毛发、骨骼等进行物种来源鉴定。

化妆品及中药材溯源： 鉴定相关产品中是否使用马源成分。

检测价值：

高特异性： 能够准确区分马、牛、羊、猪、鸡等其他常见动物。

高灵敏度： 即使样品中马肉含量极低（如<0.1%），也能准确检出，有效防止商业欺诈。

监管与维权： 为政府监管部门提供可靠的技术手段，保护消费者权益和宗教信仰（如某些宗教禁食马肉）。

抗干扰能力强： 适用于检测深加工、高温高压处理过的复杂样品，因为DNA比蛋白质更稳定。

二、 检测原理

该技术基于实时荧光PCR和TaqMan探针法。

靶基因选择： 设计针对马物种特异性基因序列的引物和探针。常用的靶基因包括：

线粒体基因： 如细胞色素b基因、12S rRNA基因、16S rRNA基因。选择这些基因是因为它们在每个细胞中有多个拷贝，能大大提高检测灵敏度。这些基因序列在马与其他物种间存在稳定差异。

DNA提取： 从待测样品（如碎肉、香肠、饲料、骨粉等）中提取总DNA。对于加工食品，DNA可能发生降解，因此对试剂盒的灵敏度要求更高。

PCR扩增与检测：

在反应体系中，特异性探针与马的DNA序列结合。

通过PCR循环，Taq酶的水解作用使报告基团（如FAM）发出荧光。

结果判读： 实时监测荧光信号，通过Ct值来判定。若存在马源性DNA，则会观察到荧光信号的指数增长。

三、 试剂盒主要组分

PCR反应液： 包含缓冲液、dNTPs、Mg2?等。

酶混合物： 包含热启动Taq DNA聚合酶。

马源性阳性对照： 含有已知浓度的马DNA片段。

阴性对照： 不含马DNA的溶液（如检测其他物种的DNA或水），用于监测污染。

内标： 这是食品检测中至关重要的质量控制组件。它通常是一种非动物源性的、已知浓度的DNA片段（如质粒DNA或植物基因），在样本制备时加入。

作用： 监控DNA提取效率以及PCR反应体系中是否存在抑制物。

判读逻辑： 如果内标通道无扩增，而马源通道也无扩增，则说明本次检测无效（可能是DNA提取失败或存在强PCR抑制物），有效避免因实验失败而导致的假阴性结果。

四、 操作步骤（简要）

样品预处理： 将固体样品充分研磨匀浆，确保取样代表性。

DNA提取与内标添加： 使用商品化DNA提取试剂盒提取DNA，并在提取初期或裂解液中加入内标。

反应体系配制： 在专用区域，将PCR反应液、酶、模板DNA等加入反应管。

上机扩增： 将反应管放入实时荧光PCR仪，运行预设程序（如：95°C预变性，然后45个循环的95°C变性、60°C退火/延伸）。

结果分析： 仪器软件自动分析荧光曲线和Ct值。

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