猫杯状病毒（FCV）检测试剂盒（荧光PCR法） 新品

商品属性：

一、 概述与临床意义

猫杯状病毒（FCV）： 是一种单股正链RNA病毒，具有高度的遗传变异性。它是引起猫上呼吸道综合征（俗称“猫感冒”）的主要病原之一，与猫疱疹病毒（FHV-1）和猫衣原体（CP）并称“上呼吸道感染三巨头”。

所致疾病：

典型症状： 主要导致口腔溃疡（最具特征性）、舌溃疡、打喷嚏、鼻分泌物、结膜炎、发热、食欲不振等。

严重形式： 某些强毒株可引起病毒性系统性FCV病（VS-FCV），导致高烧、皮下水肿、皮肤溃疡、黄疸和高死亡率，这是一种急性的全身性严重疾病。

检测价值：

快速鉴别诊断： 能快速将FCV感染与症状相似的FHV-1、CP感染区分开来，虽然治疗都以支持疗法为主，但精确诊断有助于预后判断和隔离防控。

高灵敏度： 即使在感染早期或病毒载量较低时也能检出，远优于病毒分离等传统方法。

携带者筛查： 可用于筛查健康猫群中的病毒携带者，这对于猫舍、救助站等密集饲养环境的疫情防控至关重要。

疫情监控： 对VS-FCV疫情的快速确认和应对具有重大意义。

二、 检测原理

FCV是RNA病毒，因此其检测流程比DNA病原体多一步逆转录。

靶基因选择： 设计针对FCV高度保守区域（如RNA依赖性RNA聚合酶基因）的引物和探针，以应对病毒的高变异性，确保检测的广泛性。

样本采集与核酸提取：

采样： 使用无菌拭子采集口咽拭子（优先）、鼻拭子、眼结膜拭子或溃疡组织液。VS-FCV病例也可采集血液或组织样本。

提取： 特别需要注意的是，必须使用能提取RNA的核酸提取试剂盒。提取过程要迅速，并避免RNA酶降解。

逆转录与PCR扩增：

该试剂盒通常是一步法RT-PCR，即逆转录和PCR扩增在同一个反应管内完成。

逆转录： 首先在较低温度（如50°C），试剂盒内的逆转录酶 将病毒的RNA模板逆转录为互补DNA（cDNA）。

荧光PCR扩增： 随后进入高温循环阶段，在Taq DNA聚合酶和特异性探针（如TaqMan探针）的作用下，对cDNA进行扩增和荧光信号检测。原理与DNA检测相同：探针水解，报告基团（如FAM）发光。

结果判读： 仪器检测荧光信号，并计算Ct值。Ct值与样本中的初始病毒RNA含量成反比。

三、 试剂盒主要组分

由于是RT-PCR，其组分与DNA检测试剂盒略有不同：

RT-PCR反应液： 包含缓冲液、dNTPs等。

酶混合物： 包含逆转录酶和热启动Taq DNA聚合酶。

FCV阳性对照： 含有已知浓度的FCV RNA片段或假病毒颗粒。

阴性对照： 无RNA酶水。

内标： 用于监控从提取到扩增的全过程，防止假阴性。由于样本差异大，内标对口腔拭子等复杂样本尤为重要。

四、 操作步骤（简要）

样本采集与保存： 采样后立即将拭子放入RNA保存液中，并尽快在-20°C或-80°C冷冻，避免RNA降解。

RNA提取： 在无RNA酶的环境下，按要求提取总RNA。

反应体系配制： 将反应液、酶、模板RNA等混合。

上机运行： 将反应管放入仪器，设置包含逆转录步骤的程序（例如：逆转录50°C 15-30分钟；预变性95°C 2分钟；然后40-45个循环的95°C 15秒，60°C 1分钟）。

结果分析： 软件自动分析。

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