毛霉菌检测试剂盒 新品

毛霉菌检测试剂盒

一、 概述与临床意义

毛霉菌： 不是一个单一的菌种，而是包括根霉属、毛霉属、根毛霉属、犁头霉属、小克银汉霉属等多个属的一大类真菌的总称。它们是引起毛霉菌病的主要病原体。

临床挑战： 毛霉菌病常见于免疫功能低下的人群（如糖尿病患者、器官移植者、白血病患者）。感染进展极快，尤其是肺部和播散性感染，死亡率极高。

检测价值：

早期快速诊断： 可在感染初期（数小时内）从临床样本中检测出毛霉菌的核酸，远比培养法（需要数天）和病理学检查快速，为抢救生命赢得宝贵时间。

高灵敏度与特异性： 能够检测出微量的真菌DNA，并准确区分毛霉菌与其它形态相似的真菌（如曲霉菌），这对治疗方案的制定至关重要（因为毛霉菌对常用于治疗曲霉菌病的伏立康唑天然耐药）。

菌属鉴别： 一些高端的多重PCR试剂盒不仅能检测毛霉菌，还能鉴别出具体的属（如根霉、毛霉），具有一定的流行病学和临床参考价值。

二、 检测原理

主流技术为实时荧光PCR技术，通常采用探针法（如TaqMan）。

靶基因选择： 试剂盒设计的引物和探针针对的是毛霉菌高度保守的特异性基因区域，最常见的靶基因是18S rRNA基因、28S rRNA基因、细胞色素b基因或内部转录间隔区。

核酸释放与提取： 从患者的临床样本（如肺泡灌洗液、组织活检、血液、脑脊液等）中提取总核酸（DNA）。对于组织样本，通常需要先进行机械破碎或酶消化以释放真菌细胞壁内的DNA。

PCR扩增与荧光信号产生：

提取的DNA与含有特异性引物、荧光探针、DNA聚合酶等的PCR反应液混合。

探针两端分别标记有报告基团和淬灭基团。当探针完整时，荧光被淬灭。

在PCR循环中，当引物和探针与目标DNA序列结合后，DNA聚合酶在延伸时会切割探针，使报告基团游离并发出荧光。

实时监测与Ct值： 实时荧光PCR仪在每一轮循环后检测荧光强度。荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数称为Ct值。

Ct值越低，代表样本中起始的毛霉菌DNA含量越高。

Ct值越高或无Ct值，代表DNA含量极低或不存在。

三、 试剂盒主要组分

一个典型的试剂盒通常包含：

PCR反应液： 包含缓冲液、dNTPs、镁离子等。

酶混合物： 热启动Taq DNA聚合酶，减少非特异性扩增。

毛霉菌阳性对照： 含有已知浓度的毛霉菌DNA片段，用于验证实验有效性。

阴性对照： 无核酸水或类似物，用于监控污染。

内标： 这是质量控制的关键组分。内标通常被添加到每个样本的裂解液或反应体系中，与目标DNA一同经历提取和扩增全过程。它用于监测：

核酸提取效率

PCR反应体系中是否存在抑制物

避免因上述问题导致的假阴性结果。

四、 操作步骤

样本采集与处理： 严格无菌操作采集合格样本（如BALF是最佳呼吸道样本），并进行必要的前处理（如匀浆、离心）。

核酸提取： 使用适合真菌破壁的核酸提取试剂盒（通常包含机械研磨或酶解步骤），提取高质量DNA。

反应体系配制： 在无菌环境中，将各组分按比例分装至PCR管中，加入模板DNA。

上机运行： 将反应管放入实时荧光PCR仪，运行预设的扩增程序（通常包括预变性、40-45个循环的变性-退火/延伸）。

结果分析： 仪器软件自动生成扩增曲线并计算Ct值。

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