禽肺病毒（APV）检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

禽肺病毒（APV）检测试剂盒(荧光PCR法)

简介：

禽肺病毒（APV）检测试剂盒(荧光PCR法)是一种基于实时荧光定量PCR技术的分子诊断工具，用于特异性检测禽肺病毒核酸。

该试剂盒通过设计针对APV基因保守区的特异性引物和探针，实现高灵敏度、高特异性检测。

检测原理

采用TaqMan探针法，通过荧光信号实时监测PCR扩增过程。探针结合APV保守基因序列，水解后释放荧光信号，实现病毒核酸定量或定性检测。

核心组成

PCR反应液：含缓冲液、dNTPs、引物/探针混合液

酶液：含Taq酶等

阳性质控品：含已知浓度APV核酸，用于验证扩增效率

阴性质控品：无APV核酸，用于排除污染。

操作流程

样本采集：病死禽取肺组织，活禽用棉拭子取呼吸道分泌物，全血样本取血清。

核酸提取：推荐磁珠法或离心柱法提取RNA，避免反复冻融。

试剂配制：根据样本数量计算反应体系（20μL/管），分装PCR反应管。

PCR扩增：

仪器设置：FAM通道采集荧光信号，淬灭基团选择None（不选ROX校正）。

反应程序：50℃ 10min（逆转录）；95℃ 2min（预变性）；45循环（95℃ 15sec→60℃ 30sec，采集荧光）。

结果判定：

阳性：Ct值≤40且曲线有明显指数增长期；

阴性：Ct值＞40或无Ct值。

存储与局限性

-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月，运输需2-8℃冰袋冷藏4。

局限性包括：样本核酸浓度过低可能导致假阴性；操作不当易致RNA降解或交叉污染；病毒基因突变可能引发假阴性。

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