阴性对照

阴性对照

简介：

核心定义

阴性对照是指在实验中设置的、已知不含有待测目标物（如病原体核酸、特定蛋白质、转基因成分等）的样本。它用于监测整个实验过程中是否存在污染或非特异性扩增，从而确保实验结果的特异性和可靠性。

简单来说，它是一个 “应该没有信号”的参照。如果它出现了信号，就意味着整个实验过程可能受到了污染，所有样本的检测结果都将被视为不可信。

二、 主要作用与目的

阴性对照的核心作用是作为一个“警报器”，其主要目的包括：

监测交叉污染：

这是最主要的作用。如果在配制反应体系时，有阳性样本或阳性对照的DNA气溶胶飘入，那么阴性对照就会出现假阳性结果。

评估试剂纯度：

确保PCR反应体系中的所有试剂（如酶、引物、水等）没有被目标核酸污染。

判断非特异性扩增：

如果试剂或操作环境存在问题，可能导致即使没有目标模板，也会产生荧光信号。阴性对照可以识别这种问题。

验证实验操作的可靠性：确保整个操作流程，从核酸提取到PCR扩增，没有引入外来污染。

三、 在荧光PCR检测中的具体应用

在您之前提到的所有荧光PCR检测试剂盒中，阴性对照都是必不可少的组成部分。

通常是什么？

最常见的是无核酸酶水。

有时也可能是确认不含有目标序列的样本DNA（如健康动物组织DNA）。

结果判读与意义：

有效实验：阴性对照的检测结果必须为阴性（无扩增曲线，或Ct值大于设定的阈值）。

如果阴性对照出现阳性结果（假阳性），则意味着：

本次实验的所有检测结果均无效，不可采信。

必须停止报告结果，排查污染源，并重新进行实验。

四、 阴性对照的种类

根据设置的位置不同，阴性对照可以分为：

提取阴性对照：

在核酸提取阶段，将一份已知为阴性的样本或无核酸酶水与待测样本一同进行提取。这可以监控核酸提取过程中是否引入污染。

扩增阴性对照（试剂空白对照）：

在配制PCR反应液时，加入一份无核酸酶水来代替样本DNA。

这是最常用和最基本的阴性对照。

模板阴性对照：

在提取后的核酸中加入一份无核酸酶水作为模板进行扩增。这主要监控PCR试剂和配制环境是否被污染。

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