芝麻源性成分检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

商品属性：

产品概述

芝麻源性成分检测试剂盒（PCR-荧光探针法）是一种基于实时荧光聚合酶链式反应技术的分子生物学检测工具，用于特异、灵敏、定量地检测食品、饲料或环境样本中是否含有芝麻成分。

该试剂盒的核心应用是食品安全与过敏原检测。芝麻是八大常见过敏原之一，对过敏个体可能引发严重甚至危及生命的反应。因此，在食品标签声明、交叉污染监控及问题产品溯源中，对芝麻成分进行精准检测至关重要。

二、 检测原理

DNA提取：从经过高度加工的食品（如饼干、巧克力、食用油等）中提取总DNA。这是检测成功的关键和难点，因为加工过程会严重破坏DNA。

荧光PCR扩增与检测：

在PCR反应体系中，包含针对芝麻基因组中高度特异性、保守的基因序列（如2S清蛋白基因）设计的引物和荧光标记探针。

探针两端分别标记有报告荧光基团和淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光信号被淬灭。

在PCR扩增过程中，当探针与模板DNA结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性会将其水解，使报告荧光基团与淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。

实时荧光PCR仪在每一个循环结束后检测该荧光信号。信号的强度与PCR反应中产生的目标DNA片段量成正比。

当荧光信号积累到超过预设的阈值时，所对应的循环数称为Ct值。样品中起始模板DNA越多，Ct值出现得就越早。

结果判读：

阳性：检测通道出现典型的S型扩增曲线，且Ct值小于或等于试剂盒规定的临界值。表明样本中含有芝麻源性成分。

阴性：无特异性扩增曲线或Ct值大于临界值。表明样本中未检测到芝麻源性成分，或含量低于方法的检测限。

三、 试剂盒组成

一个典型的试剂盒包含：

PCR反应液：含有针对芝麻特异性基因设计的引物和荧光探针、dNTPs、缓冲液等。

热启动Taq DNA聚合酶

阳性对照：含有芝麻特异性DNA片段的质粒或芝麻基因组DNA。

阴性对照：无菌水或非芝麻DNA。

四、 技术特点与优势

高特异性：针对芝麻独有的DNA序列，能准确区分芝麻与花生、大豆等其他常见过敏原及谷物，有效避免假阳性。

高灵敏度：即使食品中只含有微量的芝麻成分（如0.1%或更低），也能被可靠地检测出来。

定量能力：通过建立标准曲线，可以实现对样品中芝麻含量的相对或绝对定量，这对于评估交叉污染程度至关重要。

抗干扰性强：能够应对食品中复杂的基质（如面粉、糖、油脂等）影响。

自动化程度高：与核酸提取仪和实时PCR仪配套，可实现高通量检测，减少人为误差。

适用于深加工样品：尽管DNA会降解，但只要靶基因片段足够短，就能从烘烤、高温灭菌等加工后的食品中检测出来。

快速：相比传统的ELISA（酶联免疫吸附测定）法，它不易受蛋白质变性的影响，尤其适合检测经过高温处理的食品。

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五、 应用场景

食品过敏原标签符合性验证：检测声称“不含芝麻”的食品，确认其是否符合标签要求。

生产线清洁验证：在生产完含芝麻产品后，对共用设备进行擦拭取样检测，以验证清洁效果，防止交叉污染。

产品召回调查：当疑似因未声明的芝麻过敏原导致召回时，进行快速确认。

原材料筛查：对进货的面粉、油脂等原材料进行筛查，确保其未被芝麻污染。

进出口检验检疫：确保食品符合目的国/地区的过敏原标签法规。

食品安全风险评估与监测：对市售食品进行抽样检测，评估芝麻过敏原的污染水平和风险。

六、 局限性

无法区分具体物种：通常只能鉴定到“芝麻”这一水平，难以精确到具体的栽培品种。

需要专业设备和人员：依赖实时荧光PCR仪和专业的分子生物学实验室操作。

检测对象是DNA而非蛋白质：虽然DNA的存在通常意味着过敏原蛋白质的存在，但在极少数情况下（如高度精炼的芝麻油），可能存在DNA被完全去除或降解而无法检出，但仍有引发过敏反应的蛋白质肽段存在。

受食品加工工艺影响大：深度油炸、高压水解等极端工艺会彻底破坏DNA，导致假阴性结果。

成本较高：相较于免疫学方法，其试剂和设备成本更高。