志贺氏菌(SH)检测试剂盒(荧光PCR法)

志贺氏菌(SH)检测试剂盒(荧光PCR法)

产品概述：

志贺氏菌检测试剂盒（荧光PCR法）是一种基于荧光聚合酶链式反应技术的体外诊断试剂盒，用于快速、灵敏、特异地检测食品、临床粪便样本或环境样本中的志贺氏菌核酸。

志贺氏菌是细菌性痢疾（菌痢）的主要病原体，传染性极强。该试剂盒通过检测志贺氏菌特有的毒力基因或保守序列，实现对病原体的精准鉴定，已成为食品安全和临床诊断领域的重要工具。

二、 检测原理：

DNA提取：从样本（如粪便、食品增菌液）中提取细菌基因组DNA。

荧光PCR扩增与检测：

在PCR反应体系中，包含针对志贺氏菌高度特异性基因序列（如侵袭性质粒抗原H基因 ipaH）设计的引物和荧光标记探针。

探针两端分别标记有报告荧光基团和淬灭荧光基团。当两者靠近时，报告基团的荧光被淬灭。

在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性会水解与模板结合的探针，使报告荧光基团与淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。

每完成一次扩增循环，就释放一次荧光信号，信号的强度与合成的DNA产物量成正比。

实时荧光PCR仪实时监测并记录荧光强度的增长。当信号超过设定的阈值时，所对应的循环数即为Ct值。

结果判读：

阳性：检测通道出现典型的S型扩增曲线，且Ct值小于或等于试剂盒规定的临界值（如Ct ≤ 35）。表明样本中含有志贺氏菌核酸。

阴性：无特异性扩增曲线或Ct值大于临界值。表明样本中未检测到志贺氏菌核酸或菌量低于检测限。

注：ipaH 基因是志贺氏菌和侵袭性大肠杆菌共有的关键毒力基因，因其在染色体和质粒上均有多个拷贝，灵敏度极高，是首选的靶基因。

三、 试剂盒组成：

一个典型的试剂盒包含：

PCR反应液：含有引物、探针、dNTPs、缓冲液等。

热启动Taq DNA聚合酶

阳性对照：含有 ipaH 基因片段的质粒DNA或灭活菌株DNA。

阴性对照：无菌水或TE缓冲液。

四、 技术特点与优势

高灵敏度：理论上可检测出单个细菌的基因组DNA，尤其适用于带菌量少的样本或早期感染诊断。

卓越的特异性：能准确鉴定志贺氏菌，并有效区分与其他肠道致病菌，如沙门氏菌、大肠杆菌O157等，避免交叉反应。

快速高效：整个检测过程（从DNA提取到结果分析）可在2-3小时内完成，远快于传统的细菌培养法（需2-4天）。

自动化与高通量：可与自动化核酸提取系统和96孔板实时PCR仪配套，实现大量样本的快速筛查。

安全性高：无需进行活菌培养和分离，降低了实验室获得性感染的风险。

五、 应用场景：

食品安全监测：对生鲜蔬菜、即食食品、水源等进行志贺氏菌污染筛查。

临床诊断：对腹泻患者，尤其是急性血便/脓便患者的粪便样本进行快速病原学确诊。

突发公共卫生事件处置：在细菌性痢疾暴发流行时，进行快速溯源和确诊。

出入境检验检疫：对进口食品、出入境人员进行快速检疫。

环境监测：监测生活污水、养殖场环境等，评估卫生状况。

六、 局限性：

无法区分死菌与活菌：PCR检测的是DNA，无法判断检出的核酸是来自具有感染能力的活菌还是已被灭活的死菌。因此，在消毒效果评估时需谨慎解读结果。

需要专业设备和人员：依赖实时荧光PCR仪和专业的分子生物学实验室操作。

对抑制剂敏感：粪便、食品中的某些成分可能抑制PCR反应，导致假阴性，因此规范的核酸提取步骤至关重要。

成本较高：相较于免疫学方法（如胶体金试纸条），其试剂和设备成本更高。

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