猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒/副猪嗜血杆菌(TGEV/PEDV/HPS)检测试剂盒(三重荧光PCR法) 新品

猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒/副猪嗜血杆菌(TGEV/PEDV/HPS)检测试剂盒(三重荧光PCR法)

简介：

该检测试剂盒是一种基于三重实时荧光定量PCR技术的体外诊断试剂。它可以在单一反应管中，同时检测并区分三种对养猪业危害严重的病原体：

TGEV（猪传染性胃肠炎病毒）：引起呕吐、水样腹泻、脱水，对仔猪高致死率。

PEDV（猪流行性腹泻病毒）：临床症状与TGEV极其相似，同样是导致仔猪严重腹泻和死亡的主要元凶。

HPS（副猪嗜血杆菌）：一种重要的细菌性病原，主要引起猪的格拉瑟病，特征为多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。

该试剂盒实现了“一管三检”，极大提升了腹泻和呼吸道/全身性感染综合征的鉴别诊断效率。

二、 检测原理（三重荧光PCR法）：

其核心是多重实时荧光PCR技术，原理与单重荧光PCR类似，但更为复杂：

核酸提取：从同一份样本（如粪便、肠道内容物用于TGEV/PEDV；血清、组织或关节液用于HPS）中提取总核酸（同时包含RNA和DNA）。

逆转录与PCR扩增：

反应体系中包含六种关键成分：

针对TGEV特异性基因的引物和探针（标记荧光基团1，如FAM）。

针对PEDV特异性基因的引物和探针（标记荧光基团2，如VIC/HEX）。

针对HPS特异性基因的引物和探针（标记荧光基团3，如CY5/ROX）。

逆转录酶：将TGEV和PEDV的RNA逆转录为cDNA。

Taq DNA聚合酶：进行PCR扩增。

dNTPs、缓冲液等。

荧光信号采集与区分：

三种探针携带不同、光谱互不干扰的荧光报告基团。

PCR仪的不同光学通道在延伸结束时，分别检测并记录三种特定的荧光信号。

整个扩增过程结束后，仪器会生成三条独立的扩增曲线，分别对应于TGEV、PEDV和HPS的扩增情况。

三、 试剂盒组成（通常包含）：

核酸提取试剂：适用于同时提取病毒RNA和细菌DNA。

三重PCR反应液：已优化浓度的引物、探针预混液。

逆转录酶 和 热启动Taq DNA聚合酶。

阳性对照：通常为含有TGEV、PEDV、HPS三种目标基因片段的混合质粒，或灭活的病毒/细菌颗粒。

阴性对照：无核酸酶水。

（可选）内标：用于监控整个检测过程，防止假阴性。

四、 操作流程：

样本采集与处理：根据可疑疾病类型采集相应样本（腹泻类样本或组织/血清样本），并进行前处理。

核酸提取：提取样本中的总核酸。

试剂配制：在PCR管中，加入三重PCR反应液、酶、模板核酸及阴阳性对照。

上机检测：

将反应管放入实时荧光PCR仪。

设置反应程序：通常为 逆转录（~50°C） → 预变性（~95°C） → 40-45个循环的 [变性 + 退火/延伸/荧光采集]。

仪器会在每个循环的退火/延伸结束时，自动采集三种荧光通道的信号。

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六、 应用场景：

高效省时：将三次独立的检测合并为一次，极大节省了检测时间、人力和试剂成本。

样本节约：仅需一份样本即可完成三种病原的筛查，尤其适用于珍贵或微量样本。

鉴别诊断能力强：能快速区分临床症状相似的TGEV和PEDV感染，并能同时排查是否存在细菌性的HPS混合感染，为临床用药和防控提供精准指导。

高灵敏度与特异性：经过优化的引物和探针体系，确保对三种病原的检测均具有高灵敏度和高特异性，互不干扰。

全面覆盖：覆盖了导致仔猪腹泻的两种最主要病毒和一种常见的细菌性继发/原发病原，诊断覆盖面广。

六、 应用场景：

猪腹泻综合征的快速鉴别诊断：准确区分TGE和PED，这是临床最迫切的需求。

混合感染调查：诊断临床上常见的病毒与细菌（HPS）混合感染情况，解释复杂病情。

猪场健康监测与流行病学调查：同时监测三种病原在猪群中的流行和分布情况。

治疗效果评估：在治疗后，可通过检测HPS的载量变化来评估抗生素疗效。