猪冠状病毒/猪急性腹泻综合征冠状病毒（PDCoV/SADS）检测试剂盒（双重荧光PCR法）

猪冠状病毒/猪急性腹泻综合征冠状病毒（PDCoV/SADS）检测试剂盒（双重荧光PCR法）

技术创新与设计原理：

1. 靶基因选择与探针设计

病原体  靶基因  荧光通道  设计意义

PDCoV  N基因（核衣壳）  FAM  高保守区，覆盖所有已知亚型

SADS-CoV  RdRp（聚合酶）  HEX  区分SADS-CoV与HKU2蝙蝠冠状病毒

2. 关键技术突破

双重扩增效率优化：采用HotStart Taq酶，避免引物二聚体干扰

抗抑制剂配方：添加BSA和甜菜碱，耐受粪便样本中胆酸盐等抑制剂

内参系统：猪GAPDH基因（CY5通道）监控样本质量

3. 性能参数（经CNAS认证）

参数  PDCoV指标  SADS-CoV指标

检测限（LOD）  8 copies/μL  5 copies/μL

特异性  不与PEDV/TGEV交叉  不与蝙蝠HKU2交叉

检测时间  1.2小时（含提取）

三、标准化操作流程与质控要点：

1. 样本采集与处理

优选样本：

急性期：仔猪小肠内容物（病毒载量＞10? copies/g）

环境监测：产房地板拭子（需PBS预洗脱）

核酸提取：

推荐磁珠法（如MagMAX? Viral RNA Kit）

粪便样本需加入10%氯仿去除脂质干扰

四、应用场景与防控价值：

1. 核心应用场景

种猪场净化：通过连续3次阴性检测确认种群净化

饲料安全监测：检测原料中可能污染的蝙蝠源性冠状病毒

疫苗研发支持：评估候选疫苗对流行株（如PDCoV CN/HN-2017株）的覆盖性

2. 经济效益分析

减少无效抗生素使用（腹泻病例中病毒性占比＞60%）

避免因误诊导致的扑杀损失（SADS-CoV暴发场需全群处置）

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