猪圆环通用/伪狂犬野毒(PCV-U/PRV-gE)检测试剂盒(双重荧光PCR法)

猪圆环通用/伪狂犬野毒(PCV-U/PRV-gE)检测试剂盒(双重荧光PCR法)

简介：

本试剂盒是一种用于同时检测和鉴别猪圆环病毒通用型和伪狂犬病毒野毒株的分子诊断试剂盒。它基于双重实时荧光PCR技术，可在一次反应中对两种病原进行快速、准确的诊断。

二、 检测目标：

猪圆环病毒通用型：检测所有已知基因型（包括PCV1, PCV2, PCV3等）共有的保守基因序列，用于筛查样品中是否存在猪圆环病毒。

伪狂犬病毒野毒株：特异性检测伪狂犬病毒的gE基因缺失株的野毒感染。

关键点：目前国内外广泛使用的伪狂犬病疫苗大多是gE基因缺失疫苗。因此，通过检测gE基因，可以有效地区分自然感染的野毒和疫苗免疫。

三、 检测原理（双重荧光PCR法）：

该方法是在单重荧光PCR基础上的升级，其核心原理是：

DNA提取：从临床样本（如血清、组织病料、口腔拭子等）中提取总DNA。

双重扩增与检测：在一个反应管中，同时包含两套完全独立的引物和探针系统：

PCV-U检测系统：针对猪圆环病毒所有基因型的保守序列设计引物和探针，其探针通常用FAM等绿色荧光标记。

PRV-gE检测系统：针对伪狂犬病毒野毒株特有的gE基因序列设计引物和探针，其探针使用VIC或HEX等黄色荧光标记。

特异性信号释放：在PCR过程中，各自系统的DNA聚合酶会水解对应的探针，释放出不同波长的荧光。

实时监控与区分判定：

实时荧光PCR仪的不同光学通道会分别收集FAM和VIC/HEX的荧光信号。

结果判定：

FAM通道有扩增：说明样品中存在猪圆环病毒。

VIC/HEX通道有扩增：说明样品中存在伪狂犬病毒野毒株感染。

四、 试剂盒典型组成：

PCR反应液：包含缓冲液、dNTPs、Mg2?等。

PCV-U引物探针混合液。

PRV-gE引物探针混合液。

Taq DNA聚合酶。

阳性对照：

含有PCV-U目标片段的质粒或DNA。

含有PRV-gE目标片段的质粒或DNA。

阴性对照：无DNA酶的超纯水。

五、 操作流程详解说明：

样品处理与DNA提取。

反应体系配制：将上述各组分（包括两套引物探针）与模板DNA在同一反应管中混合。

双重荧光PCR扩增：

将反应管放入荧光PCR仪。

设置程序：预变性 → 多轮循环的变性、退火/延伸。

结果分析：

仪器软件会分别在FAM通道和VIC/HEX通道下生成扩增曲线。

六、 技术特点与优势：

高效省时：一次检测即可完成两种病原的筛查，将两次检测合并为一次，极大提升了检测效率，节省了成本和样品用量。

七、 主要应用场景：

猪场疾病诊断：对出现繁殖障碍、呼吸道症状、神经症状的猪群进行病原学排查。

伪狂犬净化监测：在实施伪狂犬净化计划的猪场，定期监测猪群中是否存在野毒感染，是净化工作的关键工具。

引种检疫：对引进的后备种猪进行严格健康监测，防止引入野毒株。

流行病学调查：了解猪场或区域内PCV和PRV野毒的感染情况和流行态势。

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