转基因水稻品系LLRICE62检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

转基因水稻品系LLRICE62检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

简介：

一、 概述：

转基因水稻品系LLRICE62是由公司研发的一种耐除草剂（草铵膦）水稻。为了对其进行精准、高效的鉴定和监管，基于实时荧光定量PCR技术的检测试剂盒成为了权威的检测方法。该方法能够特异性地检测出LLRICE62品系中的独特DNA序列。

二、 检测目标：

本试剂盒专门用于定性检测样品中是否含有转基因水稻LLRICE62的特定DNA序列。它通过扩增和检测LLRICE62品系中特有的基因构建元件或基因组边界序列，来实现对该品系的特异性鉴定。

三、 检测原理（PCR-荧光探针法）：

该方法是实时荧光定量PCR技术的具体应用，原理如下：

DNA提取：从水稻样品（谷粒、米粉、秸秆等）中提取总DNA。

PCR扩增：在PCR反应体系中，包含：

特异性引物：一对寡核苷酸引物，能精准识别并结合到LLRICE62特有序列的两侧。

荧光标记探针：一条特异的TaqMan探针，其两端分别标记了一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。该探针能与两条引物之间的目标序列互补结合。

荧光信号释放：在PCR延伸阶段，DNA聚合酶在合成新链的同时，会利用其5'→3'外切核酸酶活性将结合的探针水解切割。

信号检测：探针被水解后，报告基团与淬灭基团分离，报告基团发出荧光。每完成一次扩增，就释放一个荧光信号。

实时监控与结果判定：实时荧光PCR仪在每一个循环结束后检测荧光信号的强度。

阳性结果：如果样品中含有LLRICE62的DNA，荧光信号会随PCR循环数的增加而指数级累积，形成一条清晰的扩增曲线。仪器通过Ct值来客观判定阳性。

阴性结果：如果样品中不含有目标序列，则无法进行特异性扩增，不会观察到荧光信号的显著增长。

四、 试剂盒典型组成：

一个完整的试剂盒通常包含：

PCR预混液：包含热启动DNA聚合酶、dNTPs、MgCl?和优化缓冲液。

引物探针混合液：针对LLRICE62品系特异性序列设计的引物和荧光标记探针（通常报告基团为FAM或VIC）。

阳性对照：含有LLRICE62目标序列的质粒DNA或基因组DNA，用于验证整个实验体系的有效性。

阴性对照：不含模板DNA的溶液（如无菌超纯水），用于监测是否存在污染。

内参检测系统：（关键组分） 用于检测样品DNA质量及PCR抑制物。通常针对水稻的内源基因（如水稻磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因或肌动蛋白基因），并使用不同颜色的荧光染料标记（如HEX/VIC），与目标检测通道区分开。

五、 操作流程详解说明：

样品制备与DNA提取：从待测水稻样品中提取高质量、可扩增的DNA。

反应体系配制：在无菌区，按说明书将预混液、引物探针 mix、模板DNA和无菌水混合。

PCR扩增与荧光检测：将反应管置于实时荧光PCR仪中，运行预设的程序（通常为：预变性 → 40-45个循环的【变性-退火/延伸】）。

结果分析：

检查阴性对照：应无扩增曲线。

检查阳性对照：应有典型的扩增曲线，且Ct值在预期范围内。

检查内参基因：所有样品的内部对照均应正常扩增，表明DNA提取合格且无抑制物。

最后判断待测样品：在内部对照正常的前提下，若FAM通道出现特异性扩增曲线，则判定为LLRICE62阳性；否则为阴性。

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六、 技术特点与优势：

高特异性：通过双重特异性（引物+探针）识别，能准确区分LLRICE62与其他转基因水稻品系（如Bt63、TT51-1等）或非转基因水稻。

高灵敏度：可检测出极低含量的转基因成分，适用于微量样品的检测。

闭管检测，防污染：整个检测过程无需开盖，有效避免了扩增产物的气溶胶污染。

自动化与高通量：适合同时对大量样品进行快速检测，效率高。

结果客观定量化：以Ct值为判定依据，结果可靠，重复性好。

七、 主要应用场景：

进出口检验检疫：确保进口水稻、大米及其制品符合中国及目的国的转基因生物安全管理法规。

种子纯度与真实性鉴定：防止未经授权的LLRICE62种子流入市场，保护非转基因水稻生产。

食品安全与标识监管：为市场监管部门提供技术支撑，确保标注“非转基因”的产品符合标准，保障消费者权益。

科学研究与环境监测：用于转基因水稻的追溯研究、基因流监测等生态安全评估工作。