转基因油菜品系RT-73检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

商品属性：

一、 概述

转基因油菜品系RT-73（也称为GT73）是由公司研发的一种抗除草剂（草甘膦）油菜。为了对其进行精准、高效的鉴定和监管，科学家开发了基于聚合酶链式反应（PCR）与荧光探针技术相结合的检测试剂盒。这种方法是目前国内外转基因产品检测的“金标准”。

二、 检测目标

本试剂盒专门用于定性检测样品中是否含有转基因油菜RT-73的特定DNA序列。它通过扩增和检测RT-73品系中特有的基因边界序列（例如，连接外源基因和油菜基因组的特定序列），来确认该品系的存在。

三、 检测原理（PCR-荧光探针法）

该方法的核心是实时荧光定量PCR（qPCR），其原理如下：

DNA提取：首先从油菜样品（种子、叶片、加工品等）中提取总DNA。

PCR扩增：在PCR反应体系中，包含：

引物：一对特异性短DNA片段，能精准识别并结合到RT-73特有序列的两端。

荧光探针：一条更短的、带有报告荧光基团（如FAM）和淬灭荧光基团的DNA探针。该探针能与目标序列的中间部分特异性结合。

当报告基团和淬灭基团距离很近时，报告基团发出的荧光会被淬灭基团吸收，仪器检测不到荧光信号。

信号释放：在PCR扩增过程中，当DNA聚合酶进行链的合成时，其固有的5‘→3’外切酶活性会将荧光探针水解切割，使报告基团与淬灭基团分离。

荧光检测：报告基团一旦游离，便会发出荧光。每扩增一条DNA链，就释放一个荧光信号。

实时监控与结果判定：实时荧光PCR仪会实时监测每个PCR循环中的荧光强度。

阳性结果：如果样品中含有RT-73的DNA，荧光信号会随着扩增循环数的增加而累积，形成一条典型的“S”型扩增曲线。仪器软件会根据荧光信号超过预设阈值所需的循环数（Ct值）来判定为阳性。

阴性结果：如果样品中不含有RT-73的DNA，则引物和探针无处结合，无法进行特异性扩增，因此不会产生荧光信号增长，结果为阴性。

四、 试剂盒典型组成

一个完整的试剂盒通常包含以下组分：

PCR反应预混液：含有耐热DNA聚合酶、dNTPs、MgCl?和缓冲液。

引物和探针混合液：针对RT-73品系特异性序列设计的引物和荧光标记探针。

阳性对照：含有已知RT-73特定DNA片段的质粒或基因组DNA，用于验证实验是否成功。

阴性对照：不含任何转基因DNA的模板（如超纯水或非转基因油菜DNA），用于排除污染和假阳性。

内参照（Internal Positive Control, IPC）：（可选但重要） 用于检测样品中是否存在PCR抑制物，确保DNA提取质量。通常针对植物通用基因（如油菜的内源基因CruA或HMG I/Y），并使用另一种荧光染料（如VIC/HEX）标记。

五、 操作流程详解说明

样品DNA提取：从待测样品中提取高质量DNA。

配制反应体系：按照说明书，将预混液、引物探针 mix、模板DNA和水在PCR管中混合。

上机运行：将PCR管放入实时荧光PCR仪，设置好循环程序（通常包括：预变性、95℃变性 -> 60℃退火/延伸，重复40-45个循环）。

数据分析：运行结束后，仪器软件自动分析荧光数据。

设置荧光阈值。

查看阳性对照和阴性对照的曲线是否符合预期。

判断待测样品是否有典型的扩增曲线。

六、 技术特点与优势

高特异性：通过特异性引物和探针的双重识别，能准确区分RT-73与其他转基因或非转基因油菜品系。

高灵敏度：可检测到极微量的转基因成分，理论上即使只有一个拷贝的靶DNA也能被检出。

快速高效：无需进行凝胶电泳，闭管操作，避免了开盖造成的污染风险，可在2-3小时内完成检测。

结果客观准确：通过荧光信号和Ct值进行判定，减少了人为判读的主观误差。

易于标准化和自动化：适合在大型实验室进行批量样品的高通量检测。

公司正在出售的产品：