转基因玉米品系DBT418检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

转基因玉米品系DBT418检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

简介：

一、DBT418品系背景与检测必要性：

品系特性

抗虫/耐除草剂：携带 Cry1Ac基因（抗鳞翅目害虫）和 pat基因（耐草铵膦除草剂），由中国农业科学院研发。

应用现状：主要在中国试验性种植，未获欧盟、美国商业化批准，需严格监管。

法规要求

中国标准：依据《农业转基因生物安全管理条例》，需标识转基因成分。

出口限制：出口至欧盟、日韩等需提供“未检出DBT418”证明（检测限≤0.1%）。

二、试剂盒核心技术设计：

靶标基因选择

主靶标：

Cry1Ac基因（杀虫蛋白基因）

品系特异性序列：DBT418的 35S-CTP融合启动子 或 T-DNA边界序列（区别于MON810、Bt176等）。

内参基因：玉米 zSSIIb（淀粉合成酶基因），确保DNA提取有效性。

荧光探针方案

双通道检测：

FAM通道：Cry1Ac或品系特异性序列。

HEX通道：zSSIIb内参基因。

灵敏度：最低检出限 10拷贝/μL（约0.05%转基因成分）。

三、检测流程与质控要点：

步骤  关键操作

1. 样本前处理  玉米籽粒需液氮研磨；加工食品（如膨化玉米）采用 磁珠法提取DNA 以提高得率。

2. PCR反应体系  含 UNG酶防污染系统；阳性对照（DBT418标准质粒）需梯度稀释验证线性。

3. 扩增程序  95℃ 3min → (95℃ 15s → 60℃ 45s)×45循环，FAM/HEX双通道采集信号。

4. 结果判读  阳性标准：Ct值≤36且扩增曲线呈典型S型；内参基因Ct≤32。

四、常见问题与解决方案：

假阳性风险

原因：交叉污染或非特异性扩增（如与Bt棉花Cry1Ac基因交叉）。

对策：熔解曲线分析 + 测序验证扩增片段。

假阴性风险

原因：深加工样本DNA降解或PCR抑制剂干扰。

对策：添加 BSA（牛血清白蛋白） 或稀释模板DNA。

法规更新提示

2025年中国农业农村部拟将DBT418纳入 强制标识目录，建议企业提前布局检测能力。

公司正在出售的产品：

五、应用场景与扩展建议：

种子认证：确保亲本种子未混杂DBT418成分。

进口清关：针对南美进口玉米检测潜在非法混杂。

科研合规：转基因生物安全评价中的品系溯源。