转基因植物CamV35S启动子检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

转基因植物CamV35S启动子检测试剂盒(荧光PCR法)

简介：

这是一种基于实时荧光定量PCR技术的分子生物学检测工具，专门用于快速、特异地检测植物样本中是否含有花椰菜花叶病毒35S启动子。

转基因植物： 指通过基因工程技术将外源基因导入到植物基因组中，从而获得新性状的植物。

CaMV 35S启动子： 是来自花椰菜花叶病毒的一个强效启动子。在植物基因工程中，它常被用作“开关”，来驱动外源基因在植物体内高效、持续地表达。因此，绝大多数第一代转基因作物（如大豆、玉米、油菜、棉花）中都含有CaMV 35S启动子。检测到它，通常意味着该样本可能含有转基因成分。

荧光PCR法： 即实时荧光定量PCR。它通过在PCR反应体系中加入荧光染料或探针，实时监测扩增产物的积累，从而实现定性（有无）和定量（多少）分析。

检测原理

该试剂盒的核心原理是TaqMan探针法，这是目前最主流的荧光PCR技术之一。

DNA提取： 首先从待测植物样品（如大豆粉、玉米颗粒等）中提取总DNA。

PCR扩增与检测：

特异性引物： 试剂盒中包含针对CaMV 35S启动子特定序列设计的引物，它们能特异性地结合到目标序列上。

荧光探针： 试剂盒还包含一个特异的TaqMan探针。该探针一端标记有报告荧光基团，另一端标记有淬灭荧光基团。当探针完整时，报告基团发出的荧光被淬灭基团吸收，仪器检测不到荧光信号。

PCR过程： 在PCR扩增过程中，当DNA聚合酶遇到结合在模板上的探针时，会利用其5‘→3’外切酶活性将探针水解切割。

荧光释放： 探针被切割后，报告基团与淬灭基团分离，报告基团发出荧光。每扩增一条DNA链，就释放一个荧光信号。

信号累积： 随着PCR循环的进行，扩增产物呈指数增长，释放的荧光信号也相应增强。实时荧光定量PCR仪会实时监测并记录每个循环的荧光强度。

结果判定：

阳性结果： 如果样品中含有CaMV 35S启动子，则会观察到荧光信号随着PCR循环数增加而显著上升，形成一条典型的“S”型扩增曲线。仪器软件会根据设定的阈值自动判读为阳性。

阴性结果： 如果样品中不含有CaMV 35S启动子，则引物和探针无处结合，无法进行特异性扩增，没有荧光信号积累，扩增曲线为一条平直线或无明显指数增长期。

主要组成部分

一个典型的试剂盒通常包含以下组分：

PCR反应液： 含有优化浓度的缓冲液、dNTPs、Mg2?等。

Hot-Start Taq DNA聚合酶： 热启动酶，可防止非特异性扩增，提高检测灵敏度。

CaMV 35S 引物和探针混合液： 预先混合好的特异性引物和荧光标记探针。

阳性对照： 含有已知浓度的CaMV 35S启动子片段的质粒或DNA，用于验证实验是否成功。

阴性对照： 不含CaMV 35S启动子的DNA或纯水，用于监测是否存在污染。

内标（可选但重要）： 许多高标准的试剂盒会包含一个内标系统，用于监控DNA提取质量和PCR反应过程是否受到抑制，避免假阴性结果。

操作流程（简要）

样本DNA提取。

配制PCR反应体系：在指定的反应管或孔板中，依次加入反应液、酶、引物探针mix和提取的DNA模板。

上机运行：将反应管放入实时荧光定量PCR仪，设置好反应程序（通常包括：预变性→ 40-45个循环的扩增（变性、退火/延伸））。

结果分析：运行结束后，仪器软件自动分析数据，生成扩增曲线图和Ct值，并据此判断阴阳性。

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主要特点与优势

高灵敏度： 可检测出极低含量的转基因成分（通常可达0.01%甚至更低）。

高特异性： 只针对CaMV 35S启动子序列进行扩增，不易受其他DNA干扰。

快速高效： 整个PCR过程通常在1.5-2小时内完成，加上前处理，可在数小时内出结果。

定量能力： 通过与标准品曲线对比，可以相对定量分析样品中转基因成分的含量。

高通量： 适合同时检测大量样本，自动化程度高。

闭管检测： PCR结束后无需开盖进行电泳，大大降低了交叉污染的风险。

应用领域

食品安全监管： 对进口大豆、玉米等农产品及其加工品进行强制性标识检验。

农产品贸易： 满足出口国或进口国对转基因产品的检测要求。

种子纯度检验： 确保非转基因种子的纯度。

科学研究： 在分子生物学、植物育种和生态学研究中使用。