转基因植物NOS终止子检测试剂盒(荧光PCR法)

转基因植物NOS终止子检测试剂盒(荧光PCR法)

简介：

检测目标

用于特异性检测转基因植物中的NOS终止子（来自根癌农杆菌Ti质粒的终止序列），常见于转基因作物（如大豆、玉米、棉花等）的基因构建体中。

方法原理

荧光定量PCR（qPCR）：通过特异性引物和探针扩增NOS终止子序列，实时监测荧光信号，实现定性和定量分析。

探针设计：通常采用TaqMan探针或SYBR Green染料法，确保高灵敏度和特异性。

适用样本

植物组织、种子、加工食品（需提取DNA）等。

二、试剂盒核心组分

（典型配置，具体以厂商说明书为准）

PCR反应液：含dNTPs、Mg2?、缓冲体系等

NOS引物对：特异性扩增NOS终止子

荧光探针（如FAM标记）

阳性对照（含NOS序列的质粒DNA）

阴性对照（非转基因植物DNA）

DNA提取试剂（部分试剂盒包含）

三、技术优势

高灵敏度：可检测低至0.1%的转基因成分。

快速高效：2小时内完成扩增与数据分析。

特异性强：避免与植物内源基因或其他转基因元件交叉反应。

四、操作流程（简化版）

DNA提取：从样本中提取高质量基因组DNA。

qPCR反应：

配制反应体系（模板DNA + 引物/探针 + 反应液）。

设置扩增程序（通常为：95℃预变性→40个循环的变性/退火/延伸）。

数据分析：根据Ct值或标准曲线判定结果。

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五、注意事项

质量控制：

确保阴性/阳性对照结果符合预期。

避免DNA降解或PCR抑制物干扰（建议检测内参基因如Le1）。

法规要求：不同国家对转基因标识阈值不同（如欧盟为0.9%，中国为0%）。

局限性：仅检测NOS终止子，需结合其他元件（如CaMV 35S启动子）进行完整转基因筛查。

六、应用场景

食品安全检测：进出口农产品合规性筛查。

农业监管：田间转基因作物监测。

科研实验：转基因植物分子特征验证。