转基因植物PAT基因检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

商品属性：

产品概述：

述本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，专用于定性或定量检测转基因植物中PAT基因的存在及表达水平。PAT基因（膦丝菌素乙酰转移酶基因）是赋予植物草铵膦抗性的关键标记基因，其检测对转基因作物监管、食品安全及科研应用具有重要意义。‌

技术优势

‌高灵敏度‌：可检测低至0.1%的转基因成分‌。

‌特异性强‌：针对PAT基因设计探针序列，避免非特异性扩增‌。

‌快速高效‌：实时监测扩增过程，2-3小时内完成检测‌。

试剂盒组成：

‌核心组分‌：PAT基因PCR反应液、内参基因反应液、Taq酶、UNG酶（防污染）及阳性/阴性对照品‌。

‌配套试剂‌：核酸提取试剂（如CTAB法或商业提取盒）‌。

应用场景：

‌转基因作物监管‌：用于进出口检验、市场抽检等‌。

‌科研领域‌：转基因植物研发中的基因表达分析‌。

操作流程：

‌样本处理‌：粉碎植物组织（粒径≤0.5mm），提取DNA并纯化‌。

‌PCR扩增‌：设置50℃（UNG酶活化）→95℃（预变性）→循环扩增（95℃变性/60℃退火延伸）‌。

‌结果判定‌：根据Ct值（PAT基因≤35为阳性，35-40需复测）‌。

操作步骤：

一、样本准备

‌样本采集‌：取植物组织（如叶片、种子），粒径≤0.5mm‌。

‌DNA提取‌：

采用CTAB法或商业提取试剂盒提取基因组DNA‌

检测DNA纯度（OD260/280≈1.8）和浓度（建议50-100ng/μL）

二、试剂准备

‌1.反应体系配制‌（25μL/孔）：

12.5μL PAT基因反应液（含引物/探针）

8.5μL无核酸酶水

4μL模板DNA（阴性对照用无核酸酶水替代）

‌2.对照设置‌：

阳性对照（含PAT基因质粒）

阴性对照（非转基因植物DNA）

空白对照（无模板）
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注意事项：

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样本处理与保存‌

样本需新鲜采集，避免老化或腐烂，建议使用幼嫩组织（如叶片、根尖）以提高DNA提取质量‌。

研磨时需在液氮中快速冷冻，防止DNA酶降解核酸‌。

提取的DNA需通过紫外分光光度法检测纯度（OD260/OD280≈1.8）和浓度，避免杂质干扰PCR反应‌。

‌试剂与耗材选择‌

使用无DNA酶的离心管、枪头及试剂，防止交叉污染‌。

推荐白色PCR管以减少背景荧光干扰，提升检测灵敏度‌。

荧光定量PCR试剂需分装保存，避免反复冻融导致活性下降‌。

‌实验操作规范‌

严格分区操作：试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离，防止气溶胶污染‌。

每次实验需设置阴性对照（无模板DNA）、阳性对照（已知PAT基因样本）及空白对照（仅缓冲液）。

加样时避免过量或不足，推荐低容量反应管以提高热传导率‌。

‌污染防控‌

定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染，可通过擦拭采样后扩增验证‌。

扩增产物需在专用区域处理，避免开盖时形成气溶胶污染‌。

‌结果判读与验证‌

内参基因（如玉米zein基因）需同步扩增，若未检出则样本无效‌。

PAT基因阳性结果需通过熔解曲线分析或测序验证特异性，排除假阳性‌。