钙离子荧光探针Fluo4AM *Ultrapure Grade*

简要概述

钙离子荧光探针Fluo4AM是 Fluo-4 的乙酰甲酯衍生物，可穿透细胞膜。进入细胞后，被细胞内的酯酶剪切形成 Fluo-4 并滞留在细胞内。Fluo-4 游离配体几乎无荧光，与钙离子结合后，荧光可增加 60 至 80 倍。

       Fluo-4 AM可用于通过多种仪器平台研究细胞内游离钙离子浓度，包括荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光酶标仪。鉴于GPCR作为治疗靶点的重要性，Fluo-4在高通量筛选和药物研发应用中也具有重要意义。

工作原理

穿透细胞膜: 将 Fluo-4 AM 溶解在 DMSO 等有机溶剂中，然后与细胞共同孵育。疏水性的 Fluo-4 AM 分子会穿过细胞膜进入细胞质。

酶解活化: 进入细胞后，细胞质内的内源性酯酶会水解掉 AM 酯基团。

探针活化与滞留: 水解后，探针恢复为带负电的、水溶性的 Fluo-4 形式（类似于五钾盐，但留在细胞内）。这种带电形式无法再穿过细胞膜，因此被“滞留”在细胞质内。

检测钙信号: 活化的 Fluo-4 与细胞质内的钙离子结合，在 488 nm 激光激发下发出强烈的绿色。

使用方法

Fluo-4 AM 的分子量为 1096.95 道尔顿。其钙结合亲和力为 345 nM。可通过将 Fluo-4 AM 溶解在 DMSO 中（2 至 5 mM）来制备储备溶液。为将其加载到细胞中，需用缓冲液（例如含有 0.04% Pluronic® F-127 的 HHBS）稀释储备液，制备成浓度为 2 至 20 µM 的工作液。

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！