兔Growth Hormoneelisa试剂盒

商品属性

目的： 本试剂盒用于定量测定兔血清、血浆、细胞上清液或组织匀浆样本中的生长激素（GH）浓度，适用于实验室研究，不适用于临床诊断。

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

预先用抗生长激素（GH）抗体包被微孔板。

依次加入标本和标准品，再加入HRP标记的检测抗体。

温育后彻底洗涤，加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。

TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，在酸性环境下转化为黄色。

颜色深浅与GH浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理与保存方法

血清样本：

使用不含热原和内毒素的试管采集血液。

3000转离心10分钟，分离血清和红细胞（避免任何细胞刺激）。

血浆样本：

使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝管采集血液。

3000转离心30分钟，取上清。

细胞上清液样本：

3000转离心10分钟，去除颗粒和聚合物后取上清。

组织匀浆样本：

加入适量生理盐水捣碎组织。

3000转离心10分钟，取上清。

保存：

若样本不立即检测，按一次用量分装后冻存于-20℃，避免反复冻融。

使用前室温解冻，确保样品均匀解冻。

主要组分（48孔或96孔配置）：

酶标包被板：1×48孔或1×96孔（2-8℃保存）。

标准品：2700ng/L或类似浓度，0.5ml×1瓶（2-8℃保存）。

标准品稀释液：1.5ml×1瓶（用于系列稀释标准品）。

酶标试剂：HRP标记的检测抗体，3ml×1瓶（48孔）或6ml×1瓶（96孔）。

样品稀释液：3ml×1瓶（48孔）或6ml×1瓶（96孔）。

显色剂A液和B液：各3ml×1瓶（48孔）或6ml×1瓶（96孔）。

终止液：3ml×1瓶（48孔）或6ml×1瓶（96孔）。

浓缩洗涤液：20倍或30倍浓缩液（如20ml×20倍×1瓶），使用前稀释。

辅助材料：

说明书：1份。

封板膜：2片。

密封袋：1个（用于保存未使用的板条）。

操作步骤

准备阶段：

试剂盒从2-8℃取出，室温平衡15-30分钟；浓缩洗涤液如有结晶，水浴加温溶解后稀释至工作浓度。

样本按第2部分预处理（如血清需稀释后使用，最终浓度计算时需乘以稀释倍数）。

加样与温育：

在包被微孔板中依次加入：

标本：建议加样量50-100μl（以说明书为准）。

标准品系列浓度（用于制作标准曲线）。

HRP标记检测抗体：100μl。

室温或37℃温育30-60分钟（具体时间见产品说明），期间避免光照。

洗涤：

倾去孔内液体，用稀释后的洗涤液填满各孔，静置30秒后倾去，重复3-5次。

显色与终止：

加入显色剂A液和B液各50μl，室温避光反应15-30分钟（TMB变蓝）。

加入终止液50μl，颜色转为黄色后30分钟内测定。

读数：

用酶标仪450nm波长测定吸光度（OD值）。

结果计算

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标（建议使用软件或半对数坐标纸）。

计算样品浓度：

根据样品OD值从曲线中读取浓度。

重要： 操作中样本可能已被稀释（如稀释5倍），最终浓度需乘以稀释因子（如×5）。

质量控制：

每次测定同时做标准曲线（复孔推荐）。

S0号标准品（0浓度）作为阴性对照。

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