兔Adipsin/FactorDelisa试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA），用于体外定量检测兔血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物液体中的 Adipsin（又称补体因子D，Factor D）。该蛋白是补体系统替代途径的关键丝氨酸蛋白酶，在炎症反应和代谢调节中具有重要作用。

检测原理

包被：微孔板预包被抗兔Adipsin/Factor D单克隆抗体。

加样：加入样本或标准品，Adipsin/Factor D 与包被抗体结合。

检测抗体：加入生物素标记的抗兔Adipsin/Factor D二抗，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

酶反应：加入链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶），与生物素结合。

显色：加入TMB底物，HRP催化显蓝色。

终止：加入终止液，蓝色转为黄色。

读数：在450nm波长下测定吸光度（OD值），Adipsin浓度与OD值正相关。

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被微孔板 | 96孔（可拆） | 1块 |

| 兔Adipsin标准品 | 冻干粉 | 2支 |

| 标准品稀释液 | 1.5mL | 1瓶 |

| 生物素标记检测抗体 | 100μL | 1瓶 |

| 辣根过氧化物酶-链霉亲和素（SA-HRP） | 100μL | 1瓶 |

| 洗涤缓冲液（20×） | 30mL | 1瓶 |

| TMB显色液 | 10mL | 1瓶 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10mL | 1瓶 |

| 封板膜 | - | 4张 |

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，-20℃保存，避免反复冻融。

细胞上清：离心去除杂质，立即检测或-80℃保存。

建议稀释倍数：通常为1:10~1:100（需预实验确定）。

标准曲线范围

0.156–10 ng/mL

灵敏度与精密度

最低检测限（LOD）：≤ 0.05 ng/mL

批内精密度：CV < 8%

批间精密度：CV < 10%

操作步骤

标准品复溶：用稀释液配制梯度浓度（0, 0.156, 0.313, 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10 ng/mL）。

加样：100μL/孔标准品或样本，37℃孵育90分钟。

洗板：洗涤液洗3次。

加检测抗体：100μL/孔，37℃孵育60分钟。

洗板：重复洗涤3次。

加SA-HRP：100μL/孔，37℃避光孵育30分钟。

洗板：重复洗涤5次。

显色：加90μL TMB，避光反应15~20分钟。

终止：加50μL终止液。

读数：立即测量450nm OD值（参考波长630nm）。

结果计算

绘制标准曲线（浓度 vs OD值），拟合4参数方程。

根据样本OD值计算Adipsin浓度，乘以稀释倍数。

注意事项

关键提醒：

不同批次试剂不可混用。

TMB对光敏感，需避光操作。

避免洗涤交叉污染。

若样本浓度过高，需进一步稀释后重测。

保存条件

未开封：2–8℃保存，有效期12个月。

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