兔IL-9elisa试剂盒

用途：本试剂盒用于体外定量检测兔血清、血浆或细胞培养上清液中的白介素9(IL-9)浓度。适用于科研实验，不用于临床诊断。具有高灵敏度（低背景、高特异性）、重复性好（批内和批间变异系数<10%），广泛用于免疫学检测领域。

实验原理

原理：采用双抗体夹心法。具体过程：

酶标板预先包被纯化的兔IL-9抗体（固相抗体）。

加入样品后，形成抗原-抗体复合物。

加入HRP标记的兔IL-9抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。

洗涤后，加入TMB底物显色，在HRP催化下呈蓝色，酸性终止后转为黄色。

使用酶标仪在450 nm波长下测量吸光度（OD值），OD值与样品中的IL-9浓度成正比。标准曲线计算浓度。

操作步骤

准备工作：

平衡所有组分至室温（约20-25°C）。

配制洗涤液：将30×浓缩洗涤液加蒸馏水稀释30倍（如取1 ml浓缩液加29 ml水）。

制备标准曲线：用样品稀释液将冻干标准品溶解至1 ml（浓度为1,600 pg/ml），然后倍比稀释为400、200、100、50、25、12.5、6.25 pg/ml系列浓度，同时设0 pg/ml空白对照（仅用稀释液）。每个浓度点重复2孔。

加样与孵育：

加标准品或样本：每孔加入100 μl（标准品、样品或空白对照）。

覆膜封板，37°C孵育1小时。

洗涤：弃去液体，每孔加入300 μl稀释洗涤液，浸泡30秒后弃去，重复5次。

加酶标试剂：

每孔加入100 μl酶标试剂，覆膜后37°C孵育30分钟。

再次洗涤5次（同上）。

显色与终止：

每孔加入100 μl TMB底物液，避光室温孵育15分钟（或见蓝色）。

加入50 μl终止液，轻摇混匀，终止反应（颜色转为黄色）。

读数和计算：

在加终止液后10分钟内，使用酶标仪在450 nm处读取OD值。

标准曲线绘制：以标准品浓度为x轴，OD值为y轴，拟合曲线。样品浓度通过曲线方程计算。

注意事项与特点

优点：

高灵敏度、低背景、特异性强、重复性好（批间差异<10%）。

操作简便，试剂稳定（保质期长），适合批量检测。

注意事项：

仅供科研使用，不可用于诊断或治疗。

标准品需新鲜配制，避免多次冻融（使用前反复颠倒助溶）。

操作时使用一次性手套，避免交叉污染；洗涤步骤要彻底。

显色时间可能因环境变化调整，确保所有步骤同步进行。

敏感样本建议复测，正常检测范围：6.25–400 pg/ml。

检测性能：

广泛的检测范围和最佳性能，可适应不同样品类型。

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