兔FGF-2/FGF basicelisa试剂盒

商品属性

保存: 2–8℃ 避光保存（详见组分表）

有效期: 12个月

检测原理

本试剂盒采用**双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）**定量检测兔血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆中的FGF-2（碱性成纤维细胞生长因子）浓度。

包被：抗兔FGF-2单克隆抗体预包被于微孔板。

结合：样本中的FGF-2与包被抗体结合。

检测：加入生物素化抗兔FGF-2二抗，形成“抗体-抗原-二抗”复合物。

显色：加入链霉亲和素-HRP（Streptavidin-HRP）和TMB底物，产生蓝色产物。

终止与读数：加入终止液（硫酸）后变为黄色，在450nm波长测定吸光度（OD值），OD值与FGF-2浓度成正比。

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 数量 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 8孔×12条 | 1板 | 2–8℃（干燥） |

| FGF-2标准品 | 冻干粉或液体 | 1瓶 | 见标签（通常需-20℃保存） |

| 标准品稀释液 | 1×10mL | 1瓶 | 2–8℃ |

| 生物素化检测抗体 | 1×120μL | 1管 | 2–8℃或-20℃ |

| 链霉亲和素-HRP | 1×120μL | 1管 | 2–8℃（避光） |

| 洗涤液（20×） | 25mL | 1瓶 | 2–8℃（用前稀释） |

| TMB显色液 | A/B液各10mL | 1套 | 2–8℃（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1×10mL | 1瓶 | 室温 |

| 封板膜 | – | 4张 | 室温 |

| 说明书 | – | 1份 | – |

样本要求

| 样本类型 | 处理方式 | 保存条件 | 备注 |

| 血清 | 室温凝固30min后，2000×g离心15min | -20℃或-80℃ | 避免反复冻融 |

| 血浆 | EDTA/肝素抗凝，离心分离 | -20℃或-80℃ | 不得使用溶血样本 |

| 细胞上清 | 1000×g离心10min去除沉淀 | -20℃或-80℃ | 避免微生物污染 |

| 组织匀浆 | 在PBS中匀浆后离心取上清 | -80℃ | 推荐蛋白浓度≥1mg/mL |

操作步骤

（一）准备工作

将试剂平衡至室温（25±2℃）。

标准品配制：用标准品稀释液稀释至梯度浓度（如：0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL）。

洗涤液配制：20×洗涤液用蒸馏水稀释至1×（例：10mL 20× + 190mL 水）。

（二）检测流程

加样：每孔加入100μL标准品/样本，覆膜，37℃孵育90min。

洗涤：甩去孔内液体，每孔加1×洗涤液300μL，静置30s后甩干，重复4次。

加检测抗体：每孔加生物素化抗体100μL，37℃孵育60min，再次洗涤4次。

加酶结合物：每孔加链霉亲和素-HRP 100μL，37℃避光孵育30min，洗涤4次。

显色：每孔加TMB显色液（A+B等体积混合）100μL，37℃避光反应15–20min（显蓝色）。

终止：每孔加终止液50μL，颜色变黄。

读数：30分钟内于酶标仪450nm波长检测OD值（建议双波长校正：450nm/630nm）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标（log值），OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值从曲线计算FGF-2浓度。

典型灵敏度：≤5 pg/mL

检测范围：15.6–1000 pg/mL

回收率：85–115%

批内/批间变异系数：CV < 10% / CV < 15%

注意事项

试剂开封后尽快使用，避免反复冻融。

TMB显色液需避光操作，变蓝后避免长时间暴露于强光。

终止液具有强腐蚀性，操作时戴手套。

样本浓度高于标准曲线最高值时，需用稀释液稀释后重新检测。

适用种属：兔（其他种属样本可能交叉反应，需验证）。

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