兔Cathepsin Delisa试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒用于定量检测兔血清、血浆、细胞培养上清液及其他生物液体中Cathepsin D的含量。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。将抗兔Cathepsin D抗体包被于微孔板上，加入标准品或样品后，再加入生物素标记的抗兔Cathepsin D抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，最后加入TMB底物显色。颜色的深浅与样品中Cathepsin D的浓度成正比。

试剂盒组成

预包被微孔板：96孔（8孔×12条）

Cathepsin D标准品：6管（浓度分别为0、50、100、200、500、1000 pg/mL）

样品稀释液：1瓶（20mL）

生物素标记抗体：1瓶（120μL）

酶结合物：1瓶（120μL）

洗涤液（20×浓缩）：1瓶（30mL）

TMB显色液：1瓶（10mL）

终止液：1瓶（10mL）

封板膜：4张

说明书：1份

储存条件

未开封试剂盒应储存在2-8℃。开封后，微孔板应密封保存于2-8℃，其他组分按说明书要求保存。

样品收集与处理

血清：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000rpm离心20分钟

血浆：使用EDTA或肝素抗凝，2000-3000rpm离心20分钟

细胞培养上清：2000-3000rpm离心20分钟

组织匀浆：按重量加入适量PBS，匀浆后3000rpm离心20分钟

操作步骤

准备：将试剂盒平衡至室温（20-25℃）

标准品稀释：按说明书梯度稀释

加样：每孔加入100μL标准品或样品

孵育：37℃孵育90分钟

洗涤：弃去液体，每孔加入洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次

加生物素标记抗体：每孔100μL，37℃孵育60分钟

洗涤：同步骤5

加酶结合物：每孔100μL，37℃孵育30分钟

洗涤：同步骤5

显色：每孔加入90μL TMB显色液，37℃避光显色15-30分钟

终止：每孔加入50μL终止液

检测：450nm波长下测定OD值

结果计算

绘制标准曲线

根据样品OD值计算Cathepsin D浓度

若样品稀释，需乘以稀释倍数

性能参数

检测范围：15.6-1000 pg/mL

最低检测限：7.8 pg/mL

批内变异系数：<10%

批间变异系数：<15%

回收率：85-115%

特异性：不与兔其他Cathepsin家族成员交叉反应

注意事项

不同批号试剂不可混用

避免反复冻融标准品和样品

严格按照说明书操作

TMB显色液避免接触金属器械

终止液为酸性溶液，避免接触皮肤和眼睛

应用领域

本试剂盒可用于心血管疾病、肿瘤、神经退行性疾病等相关研究。

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