小鼠Adipsin/FactorDelisa试剂盒

产品概述

小鼠Adipsin/Factor D ELISA试剂盒是一种用于定量检测小鼠血清、血浆或其他生物液体中Adipsin/Factor D含量的酶联免疫吸附测定试剂盒。Adipsin(又称补体因子D)是一种主要由脂肪细胞分泌的丝氨酸蛋白酶，在补体替代途径中起重要作用。

产品信息

规格: 96孔板

检测范围: 0.156-10 ng/mL

灵敏度:<0.078 ng/mL

样本类型: 血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆

保存条件: 2-8°C保存，有效期12个月

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。将抗小鼠Adipsin抗体预包被于酶标板上，加入标准品或样本后，再加入生物素标记的抗小鼠Adipsin抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物。随后加入链霉亲和素-HRP，通过TMB底物显色，颜色的深浅与样本中小鼠Adipsin的浓度成正比。

试剂盒组成

预包被酶标板: 96孔(8孔×12条)

小鼠Adipsin标准品: 6管(浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.312 ng/mL)

样本稀释液: 1瓶(20mL)

生物素标记抗体: 1瓶(120μL)

链霉亲和素-HRP: 1瓶(120μL)

洗涤缓冲液(20×): 1瓶(25mL)

TMB底物溶液: 1瓶(10mL)

终止液: 1瓶(10mL)

封板膜: 4张

说明书: 1份

样本收集与处理

血清: 室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000rpm离心20分钟取上清

血浆: EDTA或肝素抗凝，2000-3000rpm离心20分钟取上清

细胞培养上清: 2000rpm离心20分钟去除颗粒物

组织匀浆: 用PBS(pH7.2-7.4)制备组织匀浆，2000rpm离心20分钟取上清

样本应分装保存于-20°C或-80°C，避免反复冻融。

操作步骤

准备: 将试剂盒平衡至室温(20-25°C)，配制1×洗涤缓冲液

加样: 分别加入标准品和样本100μL至相应孔中，空白孔加样本稀释液

孵育: 37°C孵育90分钟

洗涤: 弃去液体，每孔加洗涤缓冲液350μL，静置1分钟后弃去，重复4次

加生物素标记抗体: 每孔加100μL，37°C孵育60分钟

洗涤: 同步骤4

加链霉亲和素-HRP: 每孔加100μL，37°C孵育30分钟

洗涤: 同步骤4

显色: 每孔加90μL TMB底物溶液，37°C避光显色15-30分钟

终止: 每孔加50μL终止液

检测: 450nm波长测定各孔OD值(建议在15分钟内完成)

结果计算

计算标准品和样本的平均OD值

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

根据标准曲线计算样本浓度

若样本被稀释，需乘以稀释倍数

注意事项

不同批号试剂盒组分不可混用

避免反复冻融标准品

严格按照说明书操作，控制反应时间和温度

TMB底物溶液应避免接触金属器械

终止液为酸性溶液，避免接触皮肤和眼睛

实验废弃物应按生物危险品处理

技术参数

精密度: 批内CV<10%，批间CV<15%

回收率: 85-115%

特异性: 不与小鼠其他补体因子交叉反应

稳定性: 未开封试剂盒2-8°C保存12个月有效

应用领域

本试剂盒可用于:

肥胖和代谢综合征研究

补体系统相关疾病研究

脂肪细胞功能研究

药物开发和药效评价

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