小鼠a-2-Macroglobulinelisa试剂盒

规格：96孔板/48孔板

产品简介

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的α-2-巨球蛋白（A2M）。具有高灵敏度、高特异性和良好的批间重复性。

检测原理

包被：微孔板预包被抗小鼠A2M单克隆抗体。

结合：样本中的A2M与包被抗体结合。

检测：加入生物素标记的二抗与A2M结合，形成免疫复合物。

显色：加入HRP标记的链霉亲和素，TMB底物显色。

终止：硫酸终止反应，450nm波长测定OD值。

试剂盒组成

| 组分 | 96T规格 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 1块 | 2-8℃ |

| A2M标准品（10μg/mL）| 2支 | -20℃ |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶 | -20℃ |

| HRP-链霉亲和素 | 1瓶 | 2-8℃ |

| TMB显色液 | 1瓶 | 2-8℃（避光） |

| 终止液 | 1瓶 | 室温 |

| 洗涤缓冲液（20X） | 1瓶 | 室温 |

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒，-20℃保存，避免反复冻融。

细胞上清：离心去除沉淀，立即检测或-80℃保存。

稀释建议：一般样本需稀释10-100倍（具体需预实验确定）。

操作步骤

标准品稀释：用标准品稀释液配制0-1000 ng/mL梯度浓度。

加样：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育2小时。

洗涤：弃液后拍干，洗涤缓冲液洗3次。

加检测抗体：每孔加入100μL生物素化抗体，37℃孵育1小时。

加酶结合物：洗涤后加入HRP-链霉亲和素，避光孵育30分钟。

显色：加入TMB显色液，室温避光反应15分钟。

终止与检测：加终止液，450nm读取OD值（参考波长630nm）。

数据分析

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值从曲线计算浓度，乘以稀释倍数。

性能参数

检测范围：3.12-1000 ng/mL

灵敏度：≤1.0 ng/mL

回收率：85%-115%

批内/批间变异系数：<10%

注意事项

试剂使用前平衡至室温，避免反复冻融。

TMB显色时间需严格控制，避免过度反应。

样本中避免使用NaN3（影响HRP活性）。

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