小鼠AGPelisa试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。预包被抗小鼠AGP抗体与样本中的AGP结合，加入生物素标记的检测抗体后形成复合物，再与HRP标记的链霉亲和素结合，通过TMB显色。吸光度（OD值）与AGP浓度成正比。

试剂盒组成

| 组分 | 96T规格 | 48T规格 |

| 预包被微孔板 | 1×96孔 | 1×48孔 |

| AGP标准品 | 2×冻干品 | 1×冻干品 |

| 样本稀释液 | 20mL | 10mL |

| 生物素标记检测抗体 | 1.5mL | 0.75mL |

| HRP标记链霉亲和素 | 1.5mL | 0.75mL |

| TMB显色液 | 10mL | 5mL |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10mL | 5mL |

| 洗涤液（20×浓缩） | 25mL | 15mL |

样本要求

血清/血浆：离心去除颗粒，避免溶血。

细胞上清液：离心后取上清，-20℃短期保存，-80℃长期保存。

组织匀浆：PBS或RIPA裂解后离心取上清。

操作步骤

标准品稀释：用标准品稀释液复溶冻干品，梯度稀释至0.5-50 ng/mL。

加样：每孔加标准品/样本100μL，37℃孵育2小时。

洗涤：弃液体，用1×洗涤液洗3次。

加检测抗体：每孔加100μL生物素标记抗体，37℃孵育1小时。

加酶结合物：每孔加100μL HRP-链霉亲和素，37℃孵育30分钟。

显色：加TMB 90μL，避光显色15分钟。

终止：加终止液50μL，450nm测OD值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

通过曲线方程计算样本浓度（推荐使用四参数拟合）。

灵敏度与精密度

检测范围：0.1-60 ng/mL

最低检测限：0.05 ng/mL

批内变异：<8%

批间变异：<10%

注意事项

避免反复冻融标准品或样本。

不同批次试剂不可混用。

TMB显色时间需严格控制，避免过度反应。

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