大鼠ENA-78/CXCL5elisa试剂盒

产品用途

本试剂盒用于定量检测大鼠血清、细胞上清液及相关液体样本中的上皮中性粒细胞活化肽78（ENA-78/CXCL5）含量，适用于科研实验。

实验原理

采用双抗体夹心法：

微孔板预包被抗大鼠ENA-78/CXCL5抗体，形成固相抗体。

加入样本或标准品后，目标抗原与固相抗体结合。

加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。

通过底物显色反应测定吸光度（OD值），样本浓度与OD值呈正相关。

试剂盒组成

预包被微孔板

标准品（冻干粉，需复溶）

HRP标记检测抗体

样本稀释液、洗涤液（浓缩液需稀释）

显色底物、终止液

封板膜等耗材

操作步骤

样本准备：

血清样本需离心去除颗粒物；细胞上清液需离心澄清。

若样本浓度过高，用稀释液适当稀释。

标准品配制：

复溶冻干标准品（初始浓度1000 ng/mL），按需倍比稀释为梯度浓度（如500、250、125 ng/mL等）。

加样与孵育：

设置空白孔（仅加稀释液）、标准品孔和样本孔。

样本孔先加10 μL待测样本，再加40 μL稀释液；标准品孔直接加50 μL不同浓度标准品。

每孔加入100 μL HRP标记抗体，37℃孵育60分钟。

洗涤：

手工洗板：每孔加满洗涤液，静置1分钟后弃液，重复5次，拍干。

自动洗板机：每孔注入350 μL洗涤液，洗5次。

显色与检测：

加入显色底物，避光反应15-30分钟。

加入终止液后，450 nm波长下测定OD值。

注意事项

试剂盒需平衡至室温（20-25℃）后使用，避免反复冻融。

浓缩洗涤液若有结晶，可40℃水浴溶解（不超过50℃）。

标准品稀释需在EP管中完成，避免孔内直接稀释。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。

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