兔AgRP/ARTelisa试剂盒

 基本介绍

目标分子：Agouti相关蛋白（Agouti-Related Protein, AgRP/ART）是一种由下丘脑神经元分泌的神经肽，分子量约10-12kDa，是能量代谢的关键调控因子。

生物学特性：

结构特征：含132个氨基酸，C端富含半胱氨酸

主要来源：下丘脑弓状核神经元

核心功能：

拮抗α-MSH对MC3/4R的作用

促进食欲和能量摄入

调节能量平衡和体重

参与糖代谢调控

 研究意义：

肥胖机制研究

神经性厌食症模型评估

代谢紊乱研究

下丘脑功能研究

 检测原理

竞争性ELISA法：

预包被：微孔板包被抗AgRP抗体

竞争反应：

样本中的AgRP与HRP标记的AgRP竞争结合位点

样本AgRP浓度越高，显色越弱

显色系统：TMB显色，450nm测定吸光度

试剂盒组成

组分  规格  保存条件  关键说明

预包被微孔板  96T（可拆）  2-8℃  密封干燥保存

AgRP标准品  0.1-20 ng/mL  -20℃  冻干粉需精密复溶

HRP标记AgRP  1.0mL  -20℃（避光）  避免反复冻融

样本稀释液  20mL  2-8℃  含蛋白酶抑制剂

TMB底物  10mL  2-8℃（避光）  开封后1月有效

终止液  10mL  室温  强酸注意防护

20×洗涤液  50mL  室温  需1:19稀释

样本要求

适用样本类型：

脑脊液（推荐采集后立即处理）

下丘脑组织匀浆（需特殊裂解）

血浆（EDTA抗凝，含蛋白酶抑制剂）

细胞培养上清

样本处理规范：

组织样本：

快速取材后液氮速冻

使用含1%蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液

超声破碎后离心（12000×g，15分钟，4℃）

液体样本：

采集后立即离心（2000×g，10分钟，4℃）

-80℃分装保存（避免反复冻融）

检测流程

标准操作程序：

标准曲线制备：

梯度稀释：0.1、0.5、1、2.5、5、10、20 ng/mL

每孔50μL标准品+50μLHRP标记物

关键步骤参数：

孵育条件：37℃ 60±2分钟

洗涤程序：300μL/孔，洗5次（浸泡30秒/次）

显色时间：15±1分钟（严格避光）

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