人Vitronectinelisa试剂盒

1. 试剂盒概述

检测目标：人玻连蛋白（Vitronectin, VTN），又称血清扩散因子（S-protein），是一种多功能糖蛋白，参与细胞黏附、凝血、补体调控等过程。

检测原理：双抗体夹心ELISA（Sandwich ELISA），特异性识别人Vitronectin。

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织裂解液等。

 2. 试剂盒组成（以典型试剂盒为例）

组分  说明

预包被微孔板  抗人Vitronectin抗体包被的96孔板

标准品  重组人Vitronectin（0-1000 ng/mL梯度浓度）

检测抗体  生物素或HRP标记的抗人Vitronectin二抗

酶结合物  链霉亲和素-HRP（若检测抗体为生物素标记）

显色底物（TMB）  用于HRP催化显色

终止液  硫酸或盐酸溶液（终止反应）

洗涤缓冲液  20×浓缩液，需稀释

样本稀释液  用于稀释高浓度样本

3. 检测原理

捕获：样本中的Vitronectin与预包被在微孔板上的抗体结合。

信号放大：加入生物素标记的二抗，再结合链霉亲和素-HRP，形成“抗体-抗原-抗体-HRP”复合物。

显色：加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色→黄色，终止后）。

检测：在450nm波长下测吸光度（OD值），计算浓度。

4. 主要应用

细胞生物学：研究Vitronectin在细胞黏附、迁移和伤口愈合中的作用。

凝血与血栓研究：评估Vitronectin在凝血系统（如结合PAI-1）中的功能。

肿瘤研究：分析Vitronectin在肿瘤微环境中的表达及作用。

免疫学：研究补体调控（如抑制MAC形成）。

5. 试剂盒特点

高灵敏度：检测下限通常为 0.1-1 ng/mL。

高特异性：仅检测人Vitronectin，不与纤维连接蛋白（Fibronectin）或其他黏附分子交叉反应。

宽检测范围：0-1000 ng/mL，覆盖生理和病理浓度（血清中正常范围：200-400 μg/mL）。

稳定性好：标准品和抗体在4℃或-20℃下可长期保存。

6. 操作步骤（简版）

标准品稀释：按说明书配制梯度浓度（如0、10、50、200、500、1000 ng/mL）。

加样：每孔加100 μL标准品或样本，37℃孵育1-2小时。

洗涤：洗板3-5次，去除未结合物质。

加检测抗体：孵育1小时，洗涤。

加酶结合物：孵育30分钟，洗涤。

显色：加入TMB反应10-15分钟（避光）。

终止：加入终止液，30分钟内测OD450nm。

7. 数据分析

使用四参数逻辑回归（4-PL）或线性回归拟合标准曲线。

样本浓度 = 根据OD值从标准曲线计算 × 稀释倍数（如有）。

8. 注意事项

样本处理：

血清/血浆需离心去除颗粒物，避免反复冻融。

细胞培养上清液需去除沉淀（如3000 rpm离心10分钟）。

实验优化：

高浓度样本需稀释至标准曲线范围内。

避免长时间暴露于室温，防止Vitronectin降解。

干扰因素：溶血或脂血样本可能影响结果。

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