人Total GLP-1elisa试剂盒

1. 试剂盒概述

检测目标：人总胰高血糖素样肽-1（Total GLP-1），包括活性形式（GLP-1(7-36)酰胺/GLP-1(7-37)）和失活形式（GLP-1(9-36)酰胺/GLP-1(9-37)）。

检测原理：双抗体夹心ELISA（Sandwich ELISA），特异性识别GLP-1的N端或C端表位。

样本类型：血清、血浆（需含DPP-4抑制剂，如抑肽酶或EDTA）、细胞培养上清液。

 2. 试剂盒组成

通常包含以下组分（以说明书为准）：

预包被微孔板：抗人GLP-1单克隆抗体包被的96孔板。

标准品：重组人GLP-1冻干粉（浓度范围通常为2-200 pM或等效pg/mL）。

检测抗体：生物素或HRP标记的抗人GLP-1二抗。

酶结合物：链霉亲和素-HRP（若检测抗体为生物素标记）。

显色底物：TMB（四甲基联苯胺）。

终止液：硫酸或盐酸溶液。

样本稀释液（含稳定剂，防止GLP-1降解）。

洗涤缓冲液（10-20×浓缩液）。

3. 检测原理

捕获：样本中的Total GLP-1与微孔板上固定的抗体结合。

信号放大：加入标记的二抗（如生物素化抗体）和酶结合物（链霉亲和素-HRP），形成复合物。

显色：TMB底物在HRP催化下显蓝色，终止后变为黄色。

检测：450nm波长下测OD值，浓度与吸光度成正比。

4. 主要应用

糖尿病研究：评估GLP-1在血糖调控中的作用（如2型糖尿病患者的GLP-1分泌缺陷）。

药物开发：监测GLP-1受体激动剂（如利拉鲁肽、司美格鲁肽）的疗效。

肥胖与代谢研究：GLP-1对食欲和能量代谢的影响。

胃肠道功能研究：GLP-1在肠-脑轴中的作用。

5. 试剂盒特点

高灵敏度：检测下限通常为1-5 pM（约3-15 pg/mL）。

广检测范围：覆盖生理（空腹）和病理（餐后）浓度（通常2-200 pM）。

抗干扰性：可检测完整GLP-1及其代谢产物，不受DPP-4酶降解影响（需样本预处理）。

种属特异性：仅检测人GLP-1，与啮齿类动物无交叉反应。

6. 操作步骤（简版）

样本预处理：血浆需立即加入DPP-4抑制剂（如10 μL抑肽酶/mL血），避免GLP-1降解。

标准品稀释：按说明书梯度稀释（如0、5、20、50、100、200 pM）。

加样与孵育：每孔加100 μL标准品/样本，37℃孵育1-2小时。

洗涤：洗板3-5次，去除未结合物质。

加检测抗体：孵育1小时后洗涤。

加酶结合物：孵育30分钟，洗涤。

显色与终止：加入TMB反应10-15分钟，终止后30分钟内检测OD450nm。

7. 数据分析

使用四参数逻辑（4-PL）或Log-Log曲线拟合标准曲线。

样本浓度需乘以稀释倍数（如有稀释）。

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