人sTNFR2/TNFRS1Belisa试剂盒

1. 试剂盒概述

检测目标：人可溶性肿瘤坏死因子受体2（soluble Tumor Necrosis Factor Receptor 2, sTNFR2/TNFRSF1B）。

检测原理：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）。

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清液等。

 2. 试剂盒组成

通常包含以下组分（具体以说明书为准）：

预包被微孔板：抗人sTNFR2抗体包被的96孔板。

标准品：重组人sTNFR2蛋白（梯度浓度，用于绘制标准曲线）。

检测抗体：生物素标记的抗人sTNFR2二抗。

酶结合物：链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）。

显色底物：TMB（四甲基联苯胺）。

终止液：硫酸或磷酸溶液。

洗涤缓冲液（浓缩液，需稀释）。

样本稀释液。

3. 检测原理

捕获：样本中的sTNFR2与预包被在微孔板上的抗体结合。

结合二抗：加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

信号放大：加入链霉亲和素-HRP，与生物素结合。

显色：加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色→黄色，加入终止液后）。

检测：450nm波长下测OD值，浓度与吸光度成正比。

4. 主要应用

炎症与免疫研究：TNF-α/sTNFR2信号通路在类风湿性关节炎、炎症性肠病等中的作用。

感染性疾病：如脓毒症、COVID-19中细胞因子风暴的监测。

肿瘤研究：sTNFR2在肿瘤微环境中的调控机制。

药物开发：评估靶向TNF-α通路药物的疗效。

5. 试剂盒特点

高灵敏度：检测下限通常为1-10 pg/mL（不同品牌有差异）。

高特异性：仅检测人sTNFR2，不与其它受体交叉反应。

重复性好：板内、板间变异系数（CV）<10%。

快速检测：操作时间约3-4小时（含孵育步骤）。

6. 操作步骤（简版）

标准品稀释：按说明书制备梯度浓度（如0-1000 pg/mL）。

加样：标准品/样本加入微孔板，孵育（通常37℃ 1-2小时）。

洗涤：洗去未结合物质。

加检测抗体：孵育后洗涤。

加酶结合物：孵育后洗涤。

显色：加入TMB，避光反应10-30分钟。

终止：加入终止液，测OD450nm。

7. 数据分析

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（四参数拟合或Logistic回归）。

根据样本OD值，从曲线中计算sTNFR2浓度。

8. 注意事项

样本处理：避免反复冻融，离心去除颗粒物。

实验条件：室温平衡试剂，严格控制孵育时间和温度。

干扰因素：溶血、脂血样本可能影响结果。

安全防护：终止液为强酸，需戴手套操作。

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