人Osteoprotegerinelisa试剂盒

1. 试剂盒基本信息

检测目标：人骨保护素（Osteoprotegerin, OPG/TNFRSF11B）

检测方法：双抗体夹心ELISA（Sandwich ELISA）

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素）、细胞培养上清、骨组织匀浆液

灵敏度：<10 pg/mL（高灵敏度版本可达<5 pg/mL）

检测范围：15.6-1000 pg/mL（部分高范围试剂盒31.2-2000 pg/mL）

检测时间：约3.5小时（快速检测试剂盒约2小时）

特异性：不与其他TNF受体家族成员（如RANK、TRAIL受体）交叉反应

 2. 试剂盒组成（96孔板）

组分  规格  保存条件  说明

预包被微孔板  8×12孔  2-8℃  抗人OPG单抗包被

OPG标准品  冻干粉×1  -20℃  复溶后0-1000 pg/mL

检测抗体  120 μL  -20℃  生物素标记抗人OPG

酶结合物  120 μL  -20℃  Streptavidin-HRP

TMB底物  10 mL  4℃（避光）  即用型

终止液  10 mL  RT  1M H?SO?

洗涤液  50 mL  RT  20×浓缩液

样本稀释液  20 mL  2-8℃  含蛋白稳定剂

3. 检测原理

捕获阶段：样本OPG与预包被抗体结合

检测阶段：生物素化二抗特异性识别OPG

信号放大：Streptavidin-HRP催化TMB显色

定量分析：450nm吸光度与OPG浓度成正比

4. 实验操作流程

样本准备：

血清/血浆：室温静置30分钟后，1000×g离心15分钟

细胞上清：直接检测或1:2稀释

骨组织：按1:5（w/v）用PBS匀浆，10000×g离心10分钟

标准曲线制备：

graph LR

A[标准品复溶] --> B[系列稀释]

B --> C[0,15.6,31.2,62.5,125,250,500,1000 pg/mL]

检测步骤：

加样：100μL/孔（标准品/样本）

孵育：37℃ 120分钟

洗涤：自动洗板机洗5次

加检测抗体：37℃ 60分钟

加酶结合物：37℃ 30分钟

显色：室温避光15分钟

终止：50μL/孔终止液

读数：450nm（参考630nm）

5. 数据分析

标准曲线拟合：

（四参数逻辑回归方程）

质量控制要求：

标准曲线R2>0.99

复孔CV<10%

质控样本回收率85-115%

6. 应用领域

骨代谢研究：

骨质疏松症诊断

绝经后骨丢失监测

糖皮质激素性骨质疏松

肿瘤研究：

多发性骨髓瘤骨病

乳腺癌骨转移

心血管疾病：

血管钙化评估

动脉粥样硬化研究

其他领域：

类风湿性关节炎

慢性肾病矿物质骨代谢异常

7. 注意事项

样本处理：

避免反复冻融（建议分装保存）

溶血样本需注明（血红蛋白>5g/L影响结果）

实验关键点：

洗涤充分（残留洗涤液会导致高背景）

严格控制孵育时间和温度

显色时间需精确控制

干扰因素：

脂血样本：TG>500mg/dL需超速离心

异嗜性抗体：建议使用阻断剂

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