大鼠血小板内皮细胞粘附分子1(PECAM-1)elisa试剂盒

一、实验原理

主要采用双抗体夹心法（主流方法）：

包被抗体：预包被抗PECAM-1单克隆抗体于酶标板，捕获样本中的靶标蛋白。

信号放大：加入生物素标记的检测抗体与靶标结合，再通过HRP标记的链霉亲和素形成免疫复合物。

显色与检测：TMB底物显色后，450 nm波长下测定吸光度（OD值），浓度与OD值呈正比。

少数品牌采用竞争法或双抗原夹心法，但应用较少。

 二、关键性能参数

参数  典型范围/值  来源

检测范围  3.12-2000 pg/mL（因品牌而异）

灵敏度  1.49-18.8 pg/mL（最低检出量）

精密度  板内CV＜10%，板间CV＜15%

特异性  与CD31同源蛋白无交叉反应

重复性  批内/批间变异系数＜10%/15%

试剂盒组成

核心组分：

预包被酶标板（48T/96T）

标准品（冻干粉，浓度梯度稀释）

Biotin标记抗体及HRP标记链霉亲和素

TMB显色液、终止液、浓缩洗涤液

样本稀释液、封板膜

辅助材料：酶标仪、移液器、离心机、EP管等。

样本处理与要求

适用样本：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆液。

处理步骤：

血清/血浆：离心分离（1000×g，15分钟），避免反复冻融。

组织匀浆：PBS清洗后匀浆，超声破碎或冻融裂解，离心取上清。

细胞培养上清：直接离心去除杂质。

注意事项：

溶血样本不可用（影响HRP活性）。

高浓度样本需稀释后检测（推荐2-5倍稀释）。

五、操作流程（以双抗体夹心法为例）

加样：标准品与样本各50-100 μL至预包被孔中。

孵育：37℃温育1-2小时。

洗涤：PBST洗板5次。

加酶标抗体：Biotin标记抗体100 μL，孵育1小时。

显色：TMB底物显色15分钟，终止液终止反应。

测定：450 nm测OD值，绘制标准曲线计算浓度。

注意事项

试剂保存：未开封试剂盒2-8℃保存，标准品-20℃分装。

操作规范：

避免孔板干燥，洗板需彻底（5次以上）。

建议使用复孔（至少双孔）减少误差。

质量控制：设置空白孔、标准曲线孔及内标孔。

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