大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF-A)elisa试剂盒

一、核心检测信息

检测目标

特异性定量大鼠血清、血浆、组织匀浆（如肿瘤、缺血心肌）或细胞培养上清中的 VEGF-A，一种由缺氧诱导因子（HIF-1α）调控的内皮细胞有丝分裂原，通过结合VEGFR-1/2受体促进血管新生，在缺血性疾病、肿瘤微环境及伤口修复中起核心作用。

 检测原理

双抗体夹心ELISA：

预包被抗大鼠VEGF-A单抗（靶向肝素结合域）捕获目标蛋白 → 生物素标记二抗（识别受体结合域）结合 → 超敏HRP-TMB显色系统（450nm/570nm双波长）。

亚型区分：可选择性检测VEGF-A164（主要活性形式）或VEGF-A120（可溶性形式）。

二、技术参数与验证

关键指标  技术说明

检测范围  10-2000 pg/mL（覆盖生理至病理浓度）

最低检测限  3 pg/mL（可检测微环境变化）

样本兼容性  血清（避免反复冻融）、肿瘤组织裂解液（含1% Triton X-100）、缺氧细胞上清（需除氧保存）

亚型特异性  与VEGF-B/C/D交叉反应＜0.1%

动态范围  线性相关系数R2＞0.995

三、典型应用场景

肿瘤血管生成

肝癌移植瘤模型中VEGF-A动态变化与微血管密度（CD31染色）的相关性

缺血性疾病

心肌梗死边缘区VEGF-A上调与侧支循环建立的时序分析

药物研发

抗VEGF抗体（如贝伐珠单抗）对大鼠视网膜病变的抑制效价评估

四、操作关键要点

样本处理

肿瘤组织：液氮速冻后需用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解

缺氧样本：需在厌氧工作站（1% O2）中处理，避免复氧导致假性降低

实验优化

高浓度样本需1:10稀释（使用含0.1% BSA的PBS）

每板设置缺氧阳性对照（CoCl2处理细胞上清）

质控要求：

每板需包含：空白孔、Hook效应对照（5 ng/mL）、跨板CV＜7%

注意事项

生理波动

运动后大鼠血清VEGF-A可升高2-3倍（需统一静息状态采样）

联合检测建议

推荐与PDGF-BB、Ang-2联检评估血管成熟度

样本保存

组织提取液-80℃分装（冻融≤1次），避免反复冻融导致二聚体解离

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