大鼠细胞间粘附分子(ICAM)elisa试剂盒

                                             大鼠细胞间粘附分子(ICAM)elisa试剂盒
一、核心检测信息

检测靶标：大鼠ICAM-1（90-110kDa跨膜糖蛋白）

检测原理：双抗体夹心ELISA（特异性识别胞外区D1-D5结构域）

动态范围：0.1-50 ng/mL（6个数量级）

灵敏度：<0.03 ng/mL（可检测单个内皮细胞表达）

 样本兼容性：

血管内皮细胞培养上清（首选）

血清/血浆（肝素抗凝）

炎症组织匀浆（含蛋白酶抑制剂）

脑微血管提取液

二、关键技术突破

抗体对设计：

捕获抗体：抗D1结构域（Clone 1A29）

检测抗体：抗D3结构域（生物素标记）

激活态检测：

特异性识别TNF-α诱导的构象表位

排除ICAM-2/3交叉反应

实验方案优化

内皮细胞激活：

刺激方案：

TNF-α(10ng/mL)+IFN-γ(100U/mL)

最佳检测时间=刺激后24h

脑组织处理：

matlab

微血管分离：

15% dextran梯度离心

裂解缓冲液=含1% CHAPS的TBS

标准曲线配置：

8点梯度（50-0.1 ng/mL）

推荐5参数logistic拟合

质量控制系统

参数  验收标准

批内CV  ≤5%

批间CV  ≤8%

可溶性ICAM回收率  92-107%

膜结合型提取效率  >85%

核心应用领域

炎症性疾病：

脓毒症内皮激活评估

关节炎滑膜炎症分级

脑血管病：

血脑屏障破坏监测

脑缺血再灌注损伤

移植排斥：

移植物血管病变预测

抗体介导排斥反应

关键操作规范

特殊处理要求：

检测膜结合型需用1% Triton X-100裂解

避免反复冻融（≤2次）

检测系统优化：

SA-HRP稀释比=1:8000

TMB显色时间=8±0.5min（精确计时）

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