大鼠碳酸酐酶Ⅱ(CA2)elisa试剂盒

                                             大鼠碳酸酐酶Ⅱ(CA2)elisa试剂盒
一、核心检测信息

检测靶标：大鼠CA2（29kDa锌金属酶）

EC编号：4.2.1.1

检测原理：双抗体夹心ELISA（特异性识别活性中心）

动态范围：0.5-100 ng/mL（5个数量级）

灵敏度：<0.2 ng/mL（可检测单肾小管段分泌）

 样本兼容性：

肾脏皮质匀浆（首选）

红细胞裂解液（1:1000稀释）

脑脊液（需浓缩5倍）

胃黏膜组织提取液

关键技术突破

抗体对设计：

捕获抗体：抗锌结合域（Clone 2C5）

检测抗体：抗β-折叠结构（HRP标记）

酶活性保护：

含10μM ZnSO的样本稀释液

排除CA1/CA3交叉反应（<0.1%）

实验方案优化

肾脏样本处理：

matlab

皮质分离：2mm纵向切片

匀浆缓冲液=25mM Tris+0.1% Triton X-114

离心条件=20000×g,30min,4℃

红细胞处理：

裂解液=10mM磷酸缓冲液(pH8.0)+1% NP-40

除血红蛋白：DEAE纤维素柱

标准曲线配置：

7点梯度（100-0.5 ng/mL）

推荐四参数logistic拟合

四、质量控制系统

参数  验收标准

批内CV  ≤5%

批间CV  ≤9%

回收率  92-108%

室温稳定性  8h（含抑制剂）

核心应用领域

肾脏疾病：

肾小管酸中毒诊断

利尿剂作用机制研究

血液系统：

溶血性贫血评估

红细胞代谢监测

神经系统：

脑脊液pH调控研究

癫痫模型分析

关键操作规范

特殊处理要求：

避免使用EDTA/EGTA（螯合锌离子）

组织样本需速冻（液氮最佳）

检测系统优化：

TMB显色时间=10±0.5min（避光）

终止后立即检测（<5min）

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