大鼠嗜环蛋白/亲环素A(CYPA)elisa试剂盒

                                             大鼠嗜环蛋白/亲环素A(CYPA)elisa试剂盒
一、核心检测信息

1. 检测原理

采用竞争性ELISA技术，特异性识别大鼠CYPA的肽基脯氨酰异构酶活性结构域（18kDa）。预包被重组大鼠CYPA与样本中的CYPA竞争结合生物素标记的单抗，通过链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与CYPA浓度负相关。

 2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  重组CYPA包被（1μg/孔）

生物素-抗体  100μL  -20℃（避光）  识别活性位点（克隆号：CY-103）

免疫抑制药物对照  0.5mL  -20℃  环孢素A（10μM）

细胞膜提取液  15mL  4℃  含0.5% NP-40

氧化应激保护剂  5mL  -20℃  含1mM DTT

性能参数

检测范围：0.1-50ng/mL（可扩展至200ng/mL）

灵敏度：0.03ng/mL（基于10%抑制率）

样本兼容性：

最佳：活化T细胞裂解液

适用：血清（需1:10稀释）、脑线粒体提取物

交叉反应：

大鼠CYPA：100%

CYPB/CYPC：<0.1%

人CYPA：92%（种属保守性）

精密度：

批内CV：7.2-9.5%

批间CV：10.3-12.8%

4. 样本处理规范

4.1 淋巴细胞活化

分离脾脏T细胞（尼龙毛柱）

用ConA（5μg/mL）刺激48小时

加入膜提取液裂解细胞

4.2 线粒体提取

差速离心法分离脑线粒体

加入含DTT的保护剂

-80℃冻存（避免反复冻融）

4.3 血清处理

使用无热原采血管

4℃ 3000×g离心20分钟

分装后-80℃保存

实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、0.1、0.5、1、5、10、25、50ng/mL

复溶液：含5mM β-巯基乙醇的PBS

关键步骤控制

竞争反应：37℃避光振荡60分钟

洗板液：含0.1% Tween-20的TBS（pH7.6）

显色终止：1M HCl（50μL/孔）

质控标准

最大结合孔OD值：≥1.5

环孢素A抑制率：≥90%（10μM）

回收率标准：85-115%

6. 主要应用方向

免疫抑制研究：环孢素A药效监测

氧化应激：缺血再灌注损伤模型

病毒感染：HIV衣壳蛋白相互作用

神经退行性疾病：线粒体功能障碍评估

注意事项

实验设计

推荐同步检测CD147（CYPA受体）

必须设置：未刺激细胞对照

干扰控制

避免使用溶血样本（影响异构酶活性）

含巯基试剂需透析去除

数据分析

采用logit-log竞争曲线拟合

线粒体数据需用蛋白含量校

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