大鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)elisa试剂盒

                                             大鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)elisa试剂盒
1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠NSE的γ-γ同源二聚体（78kDa）。预包被抗大鼠NSE单抗（克隆号：NES01）捕获样本中的NSE，生物素标记的二抗通过链霉亲和素-HRP系统催化超敏TMB显色，450nm吸光度值与NSE浓度呈正相关。

2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力单抗（Kd=0.08nM）

重组标准品  0-100ng/mL  -80℃  纯化大鼠脑提取物（ISO 17511标准）

脑脊液保护液  10mL  -20℃  含抗氧化剂复合物

溶血阻断剂  5mL  4℃  消除红细胞干扰

神经元裂解液  15mL  4℃  含1% CHAPS去垢剂

 3. 性能参数

检测范围：0.5-50ng/mL（可扩展至200ng/mL）

灵敏度：0.12ng/mL（基于3SD空白值）

样本兼容性：

最佳：脑脊液（腰椎穿刺获取）

适用：血清（需1:5稀释）、海马组织匀浆

交叉反应：

大鼠NSE：100%

非神经元烯醇化酶（αα/αγ）：<0.01%

人NSE：15%（种属交叉）

精密度：

批内CV：4.2-6.5%

批间CV：7.8-9.6%

4. 样本处理规范

4.1 脑脊液采集

大鼠枕大池穿刺取100μL CSF

立即加入等体积保护液

4℃ 10000×g离心15分钟

4.2 脑组织处理

快速分离海马体（冰上操作）

按1:9（w/v）加入冷裂解液

超声破碎（冰浴，10kHz，3×5秒）

4℃ 15000×g离心30分钟

4.3 血清特殊处理

采集后1小时内离心（3000×g，15min）

溶血样本需加2倍体积阻断剂

-80℃分装保存（≤2次冻融）

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、0.5、1、2.5、5、10、25、50ng/mL

复溶液：含5mM Mg2的Tris-HCl（pH7.4）

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温振荡（200rpm）

洗板液：含0.02% Proclin 300的PBS

显色终止：1M HPO（终止更彻底）

质控标准

空白OD值：≤0.05

最低检测限：≥0.5ng/mL

脑损伤阳性对照：≥15ng/mL

6. 主要应用方向

脑损伤评估：缺血缺氧性脑病分级

神经退行性疾病：AD/PD模型神经元损伤

神经肿瘤：胶质瘤浸润程度监测

心脏骤停：脑复苏预后判断

7. 注意事项

实验设计

推荐采样时间：损伤后6-72小时

必须设置：假手术对照组

干扰控制

避免使用溶血样本（Hb>0.1mg/mL）

高脂样本需超速离心（12000×g，20min）

数据分析

推荐五参数logistic曲线拟合

脑脊液数据需用总蛋白校正

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